DNA改组在现代生物工程中的应用.pdf

· 综述与专论 · 药学进展 3442010，Vo．／34，No．8 2010年第34卷 第8期 第344页 Progress PharmaceuticalSciences doi：10．3969／j．issn．1001—5094．2010．08．002 DNA改组在现代生物工程 中的应用 李健炜， 陈建华 (中国药科大学生命科学与技术学院，江苏 南京210009) [摘要] 概述了DNA改组技术的原理和特点，并对该技术应用于蛋白质、酶和细胞因子的定向进化及代谢工程的 研究成果进行了简要介绍。DNA改组技术 自20世纪9o年代发明以来飞速发展，逐渐成为一种广泛应用的分子定 向进化手段。 [关键词] DNA改组；分子定向进化；现代生物工程 [中图分类号] Q819 [文献标志码] A [文章编号】1001—5094(2010)08—0344一o7 ApplicationofDNAShufflinginModernBiologicalEngineering LIJian—wei， CHENJian—hua (SchoolofLifeScienceandTechnology,ChinaPharmaceuticalUnivemity,Nanjing210009，China) 【Abstract】 TheprincipleandcharacteristicsofDNAshufflingwerereviewedinthispaper．Theapplica— tionofDNA shufflinginhtedirectedevolutionofproteins，enzymesnadcytokines，aswellasmetabolic engineering，wasalsobrieflyintroduced．Since1990swhenDNA shufflingwasinvented，ithasbecomea populartechniqueandhasbeenwidelyusedasamehtodofmoleculardirectedevolution． 【Keywords】 DNAshuffling；moleculardirectedevolution；modelTlbioengineering DNA改组 (DNA shuffling)，也称分子 育种 中。本文现就DNA改组技术的基本原理、特点及其 (moleeularbreeding)或有性PCR(sexualPCR)，是 以 在上述领域中的应用情况作一综述。 单个基因或多个同源基因(一般为天然存在的基因家 1 DNA改组的基本原理 族)为模板，将其切割成一系列随机大小的DNA小片 段，然后在体外通过聚合酶链式反应 (polymerase DNA改组可分为如下4步：1)以单个基因或一 chainreaction，PCR)将这些片段随机重组成全长基 组同源基因为模板，用化学方法 [如脱氧核糖核酸 因，实现同源基因重组，达到分子进化 目的的一种技 酶 I(DNaseI)酶切]或物理方法 (如超声破碎法)将 术。自1994年美国人 Stemmer首次提出DNA改组 基因切割成一定大小的片段；2)由于这些小片段间 的概念后，该技术成为继易错 PCR(eITor—prone 具有一定同源性，可互为引物，故而可在不加引物的 PCR)和寡核苷酸定点突变 (oligonucleotided·irected 情况下通过PCR法将小片段组装成大片段，完成基 mutagenesis)后又一实现体外分子进化的方法…。 因的重聚。当产物序列接近 目的基因长度时，再加 近年来 ，DNA改组技术 日益成熟，已广泛应用于生 入合适的引物将大片段相连，得到一个重组基因文 物制药、疫苗研发、基因治疗等现代生物工程领域 库，将此文库导人