畜肉中阿托品、山莨菪碱、东莨菪碱、普鲁卡因和利多卡因的测定.docx

畜肉中阿托品、山莨菪碱、东莨菪碱、普鲁卡因和利多卡因的测定BJS 2017111 范围本方法规定了畜肉中阿托品、山莨菪碱、东莨菪碱、普鲁卡因和利多卡因残留量的液相色谱-串联质谱测定方法。本方法适用于畜类肌肉组织中阿托品、山莨菪碱、东莨菪碱、普鲁卡因和利多卡因的定性确证和定量测定。2 原理用磷酸盐缓冲溶液提取畜类肌肉组织中阿托品、山莨菪碱、东莨菪碱、普鲁卡因和利多卡因，提取液经离心、净化后用液相色谱-串联质谱仪测定，外标法定量。3 试剂和材料以下所用的试剂，除特别注明外均为分析纯，水应为符合GB/T 6682规定的一级水。3.1 试剂3.1.1 甲醇（CH3OH）：色谱纯。3.1.2 乙腈（CH3CN）：色谱纯。3.1.3 甲酸（HCOOH）：色谱纯。3.1.4 乙酸（CH3COOH）：色谱纯。3.1.5 正己烷（C6H14）：色谱纯。3.1.6 氢氧化钠（NaOH）。3.1.7 磷酸二氢钾（KH2PO4）。3.1.8氨水（NH3·H2O）。3.2 试剂的配制3.2.1 氢氧化钠溶液（200 g/L）：称取氢氧化钠（3.1.6）20g，加适量的水溶解，冷却后加水稀释至100 mL，混匀。3.2.2 磷酸二氢钾缓冲溶液（0.1mol/L）：称取磷酸二氢钾（3.1.7）13.6g，加水溶解至近1000 mL，用氢氧化钠溶液（3.2.1）调节pH至4.0，加水定容至1000 mL，混匀。3.2.3甲酸溶液（2 mL/100 mL）：移取甲酸（3.1.3）2 mL，加水稀释至100 mL，混匀。3.2.4 氨水甲醇溶液（2+98）：移取氨水（3.1.8）2 mL，加甲醇（3.1.1）稀释至100 mL，混匀。3.2.5 乙酸溶液（0.1 mL/100 mL）：移取乙酸（3.1.4）1 mL，加水稀释至1000 mL，混匀。3.2.6 甲酸溶液（0.1 mL/100 mL）：移取甲酸（3.1.3）1 mL，加水稀释至1000 mL，混匀。3.3 标准品硫酸阿托品、消旋山莨菪碱、氢溴酸东莨菪碱、普鲁卡因和利多卡因标准品的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量和折算系数见附录A表A.1，纯度均≥98%。3.4 标准溶液的配制3.4.1 标准储备液（100 mg/L）：准确称取标准品（3.3），分别折算成含阿托品、山莨菪碱、东莨菪碱、普鲁卡因和利多卡因10 mg（精确至0.0001 g），置于100 mL烧杯中，加适量的甲醇（3.1.1）溶解，并用甲醇转移并定容至刻度，摇匀，配制成浓度为100 mg/L标准储备液。置-18 ℃以下冰箱中保存，有效期6个月。3.4.2 标准中间液（1.00 μg/mL）：移取标准储备液（3.4.1）1.00 mL，置100 mL容量瓶中，加甲醇（3.1.1）定容至刻度，摇匀，配制成浓度为1.00 μg/mL标准工作液。置于4℃~8℃保存，有效期3个月。3.4.3 标准工作溶液：临用现配。3.5 SPE小柱：Oasis MCX阳离子交换柱，60mg/3mL，或性能相当者。4 仪器和设备4.1 液相色谱-串联质谱仪：配电喷雾离子源（ESI）。4.2 均质器。4.3 高速冷冻离心机：转速≥10000 r/min。4.4 固相萃取装置。4.5 涡旋混合器。4.6 超声波清洗器。4.7 氮气吹干仪。4.8 电子天平：感量分别为0.01 g和0.000 1 g。4.9 pH计:精度0.01。5 测定步骤5.1 试样的制备与保存取空白或供试肌肉组织，绞碎，并使均质，得空白或试样。5.2 试样的处理5.2.1 提取称取试样5 g（精确至0.01g）于50 mL具塞离心管中，加入磷酸二氢钾缓冲溶液（3.2.2）20 mL ，加盖后涡旋2 min，再超声处理15 min， 4℃以下10000 r/min离心15min，上清液倒入另一离心管中。残渣中再加入缓冲溶液20 mL，重复提取一次，合并上清液，滤纸过滤，用上述缓冲溶液4 mL洗涤滤纸，收集全部滤液于50 mL容量瓶中，用缓冲溶液定容至50 mL，待净化。5.2.2 净化Oasis MCX阳离子交换柱使用前依次用3 mL甲醇（3.1.1）、3 mL水和3 mL甲酸溶液（3.2.3）活化，保持柱体湿润。取待净化液5.00 mL加入SPE小柱（3.5），流速控制在1 mL/min内，依次用3 mL甲酸溶液、3 mL甲醇、3mL正己烷（3.1.5）淋洗小柱，弃去全部流出液，在65 kpa 的负压下，抽干2 min，最后用氨水甲醇溶液（3.2.4）5 mL洗脱，收集洗脱液。洗脱液在40℃以下氮气吹干，加入甲酸溶液（3.2.6）1.00mL，涡旋0.5 min，过0.22 μm滤膜，供测定。5.3 标准工作溶液的制备称取空白试样5 g（精确至0.01 g）于50 mL具塞离心