第四部分－中药指纹图谱研究实例.ppt

中药指纹图谱实例讲解（丹红注射粉针指纹图谱相关性研究） 第四部分 丹参、红花指纹图谱研究 丹参 红花 原材料的收集 丹参（Radix et rhizoma salviaemiltiorrhizae）为唇形科植物丹参Salvia miltiorrhizae Bge的干燥根及根茎。 红花(Flos carthami)为菊科植物红花Carthamus tinctorius L.的干燥花 . 本实验共收集10批丹参和红花，经鉴定为正品，符合药典要求. 色谱条件的选择 1.色谱柱选择 考察三根不同厂家生产的色谱柱 Agilent Zorbax XDB C18柱（安捷伦公司，250mm×4.6mm i.d,5μm，SN :USNH007334） Kromasil KR100-5 C18柱 （250mm×4.6mm i.d,5μm，SN :E16728） 依利特C18柱（大连依利特分析仪器有限公司，250mm×4.6mm i.d,5μm，SN :E1620505） 结果表明使用Kromasil KR100-5 C18柱对样品中各成分能实现较好的分离。 流动相的选择 考察了甲醇-磷酸水溶液；乙睛-水溶液；乙睛-磷酸水溶液的梯度度洗脱系统，结果表明使用乙睛-磷酸水溶液系统对样品中各成分能实现较好的分离。 检测波长的选择 用二极管阵列检测器考察不同吸收波长图谱，重点观察了205nm、254nm、280nm、326nm的图谱。结果表明，280nm图谱中蜂数较多，图谱清晰、特征性强，具有较好的代表性，且不同成分的响应值较为均匀，并考虑到与注射用丹红（粉针）的测定条件相平行，因此选择280nm作为检测波长。 柱温 提高流动相温度可增加增加被分离成分溶解度，增加流动相的洗脱能力。一般选择 25℃室温，特殊情况下选择高于室温条件。 建议：最好采用柱温箱控制温度。 流速 根据不同的柱子选择相应的流速。本实验采用分析柱，流速控制1ml/min. 供试品溶液的制备 取丹参药材粉末（过40目）0.50g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入水50.0ml,称定重量，在90℃水浴回流提取3h,取出，放冷，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，微孔滤膜（0.45μm）滤过，即得。 取红花药材粉末（过40目）0.50g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入水50.0ml,称定重量，在90℃水浴回流提取2h,取出，放冷，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，微孔滤膜（0.45μm）滤过，即得。 方法学考察 稳定性试验：主要考察供试品的稳定性。 精密度试验：主要考察仪器的精密度。 重现性试验：主要考察实验方法的重现性 结果表明：各峰的相对保留时间和相对峰面积基本一致，RSD小于5.0％。 参照物的选择 原儿茶醛、丹参素钠、丹酚酸B为丹参中的主要活性成分，容易辨认，易于购得，因此选择原儿茶醛、丹参素钠、丹酚酸B为丹参药材指纹图谱参照物。 羟基红花黄色素A为红花中的主要活性成分，含量较大，容易辨认，易于购得，因此选择红花黄色A，为红花药材指纹图谱得参照物。 注射用丹红（粉针）由丹参红花组方而成，因此选择原茶醛、丹参素钠、丹酚酸B和羟基红花黄色素A为注射用丹红（粉针）色谱指纹图谱的参照物 色谱条件的建立 柱温：30℃ 流速：1ml/min 检测波长：280nm 进样量：20μL 积分参数：Slope Sensitivity: 5,peak width: 0.04,最小峰面积为S峰峰面积的20% 色谱柱：Kromasil KR100-5 C18柱（250mm×4.6mm i.d,5μm，SN :E16728） 流动相：A泵：0.7﹪磷酸水溶液 B泵：乙睛 梯度程序如下所示：（梯度滞后时间0.05min） 丹参色谱图 10批丹参药材图谱 丹参药材对照图谱 红花药材色谱指纹图谱 10批红花药材色谱图 红花药材生成对照图谱 注射用丹红（粉针）色谱指纹图谱 10批注射用丹红（粉针）图谱 10批注射用丹红（粉针）生成对照图谱 10批中间体色谱图谱 10批中间体生成对照图谱 * * 丹 参 青岛 Salvia miltiorrhizae Bge 18 南京 Salvia miltiorrhizae Bge 17 武汉 Salvia miltiorrhizae Bge 16 杭州 Salvia miltiorrhizae Bge 15 河南 Salvia miltiorrhizae Bge 14 湖南 Salvia miltiorrhizae Bge 13 广州 Salvia mi