高效液相梯度洗脱法同时测定复方诺氟沙星滴耳液中3组分含量研究.docVIP

高效液相梯度洗脱法同时测定复方诺氟沙星滴耳液中3组分含量研究 　　【摘 要】目的：探讨高效液相梯度洗脱法（HPLC）用于复方诺氟沙星滴耳液中甲硝唑、诺氟沙星以及丙酸倍氯米松3种含量同时测定的可行性及效果。方法：建立HPLC条件为5μm，4.6mm×250mm Kromasil C18柱，以甲醇-乙腈-磷酸溶液（0.025mol/L，pH=3.0）-注射用水作为流动相，测定复方诺氟沙星滴耳液中甲硝唑、诺氟沙星以及丙酸倍氯米松的含量。结果：测得甲硝唑、诺氟沙星以及丙酸倍氯米松的线性范围依次为15.0～151.0μg/ml、14.9～150.1μg/ml、2.5～26.0μg/ml，平均回收率依次为99.8%、99.6%、99.7%；RSD依次为0.79%、0.81%、0.91%。结论：采用HPLC法同时测定复方诺氟沙星滴耳液有效成分含量操作简便快速，且准确度较高，可用于复方诺氟沙星滴耳液的质量控制。 【关键词】高效液相梯度洗脱法；复方诺氟沙星滴耳液；甲硝唑；诺氟沙星；丙酸倍氯米松 复方诺氟沙星滴耳液主要是由甲硝唑、诺氟沙星以及丙酸倍氯米松3种成分组成的复方制剂，具有高效及广谱抗菌作用，多用于急慢性化脓性中耳炎的治疗[ 1 ]。为确保药品质量控制的有效性，提高用药安全性以及有效性，药物有效成分含量测定具有重要意义[2]。本研究建立高效液相梯度洗脱法（HPLC）同时测定该制剂中甲硝唑、诺氟沙星以及丙酸倍氯米松的含量，现总结报道如下： 1 仪器与试剂 1.1 实验仪器 色谱仪为Ultimate 3000型高效液相色谱仪，包括配套二极管阵列检测器、Chromeleon工作站以及四元低压混合系统。岛津AEU-210型电子天平以及HS-2060型超声仪。 1.2 实验试剂 甲硝唑对照品（97.8%）、诺氟沙星对照品（97.8%）以及丙酸倍氯米松对照品均选自中国药品生物制品检定所。复方诺氟沙星滴耳液为本院自制。乙腈、甲醇以及三乙胺均选择色谱纯，其余试剂均选择分析纯，用水均选择新制注射用水。 2 试验方法与结果分析 2.1 溶液配制 精密称取61.4mg诺氟沙星以及60.2mg甲硝唑对照品置于同一容量为10ml的容量瓶中，加入5ml 0.1mol/L的盐酸溶液，经超声溶解后加水稀释至容量品刻度，以此作为对照品储备液1；同时称取10.2mg丙酸倍氯米松置于10ml容量品中，加水充分溶解并且稀释至刻度作为对照品储备液2。分别量取5ml对照品储备液1和2，置于100ml容量瓶中，并加水稀释至刻度，充分摇匀，以此作为对照品溶液，甲硝唑、诺氟沙星以及丙酸倍氯米松的浓度依次为0.301mg/ml、0.300mg/ml和0.051mg/ ml。 2.2 色谱条件建立 以Kromasil C18柱为色谱柱，参数为5μm，4.6mm×250mm。以甲醇为A相，以乙腈为B相，以经三乙胺调节pH=3.0的磷酸溶液（0.025mol/L）作为C相，以注射用水作为D相。洗脱顺序：流速均为0.7ml/min，0～11min时，A-D项相构成比为0%、16%、84%、0%；13～25min时A-D项相构成比为85%、0%、0%、15%；27～30min时A-D项相构成比为0%、16%、84%、0%。柱温均为室温，波长均为241nm，进样量均为20μl。于上述色谱条件下同时检测甲硝唑、诺氟沙星以及丙酸倍氯米松含量，在相同保留时间处均无杂质吸收峰，提示辅料以及溶剂对成分峰无影响，两峰之间分离度均在1.5以上。 2.3 线性关系分析 分别量取上述对照品溶液0.5ml、1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml和5.0ml，置于容量为10ml的容量瓶中，分别加水稀释至刻度并充分摇匀，即为对照品系列。取上述溶液各10μl加入液相色谱仪中测定，并记录其色谱图，绘制峰面积（A）-浓度（C）曲线，获得甲硝唑线性回归方程为A甲=0.5542C+7.287（r=0.9994），诺氟沙星为A诺=0.592C+7.287（r=0.9995），丙酸倍氯米松为A丙=0.4364C+0.947（r=0.9995）。线性范围依次为15.0～151.0μg/ml、14.9～150.1μg/ml、2.5～26.0μg/ml，线性关系良好。 2.4 精密度测定试验 取线性关系范围内对照品溶液进样测定，连续测定6次，获得甲硝唑、诺氟沙星以及丙酸倍氯米松的RSD依次为0.58%、0.62%、0.72%。 2.5 稳定性测定试验 取20μm供试品溶液，分别于0h、2h、4h、6h及8h进样测定，结果显示，甲硝唑、诺氟沙星以及丙酸倍氯米松的RSD依次为0.84%、0.70%、0.73%。 2.6 含量测定 量取1ml样品置于50ml容量瓶中，并加