高效液相色谱法和荧光偏振免疫法在抗癫痫药血清浓度测定中相关性比较研究.docVIP

高效液相色谱法和荧光偏振免疫法在抗癫痫药血清浓度测定中相关性比较研究 　　[摘要] 目的 探究HPLC与FPIA两种方法在抗癫痫药血清浓度测定中的相关性。 方法 采集本院收治的经苯妥英钠（PT）、苯巴比妥（PB）、卡马西平（CBZ）治疗的103例癫痫患者血清，分别采用高效液相色谱法、荧光偏振免疫法测定其血药浓度并进行线性回归分析。 结果 所得的线性回归方程为YPT=-1.421+1.141X（r=0.963）；YPB= -0.128+0.956X（r=0.949） ；YCBZ=0.183+0.954X（r=0.944），且两种方法测得的值呈线性相关；经配对t检验后，两者差异有统计学意义（P0.05）。 结论 高效液相色谱法与荧光偏振免疫法两种方法测定抗癫痫药血清浓度具有相关性。采用HPLC法和FPIA法进行CBZ、PT、PB的血清浓度测定各有利弊，须结合检测药物种类数目、受检人数等合理选择监测方式 [关键词] 高效液相色谱法；荧光偏振免疫法；抗癫痫药 [中图分类号] R971；R927 [文献标识码] B [文章编号] 2095-0616（2013）21-61-03 癫痫（epilepsy）是多种原因导致的脑部神经元高度同步化异常放电的临床综合症[1]。癫痫的治疗仍以药物为主，临床常用的有苯妥英钠（PT）、苯巴比妥（PB）、卡马西平（CBZ）等。但由于这些药物常有不同程度的不良反应，且较容易发生中毒症状。因此需监测抗癫痫药物的血清浓度，进而保证使用安全。目前，高效液相色谱法（HPLC）与荧光偏振免疫法（FPIA）是最常用的监测血药浓度方法[2]。为了探究HPLC与FPIA在测定常用抗癫痫药物血清浓度的相关性，本资料对其进行实验研究并报道如下。 1 资料与方法 1.1 一般资料 研究对象为2012年6月～2012年12月在我院神经内科治疗的103例癫痫患者，按照使用抗癫痫药物的不同，分为PT组31例，CBZ组43例，PB组29例。3组间患者的性别、年龄等一般情况比较差异无统计学意义。癫痫的诊断与分类按照1989年国际抗癫痫联盟分类标准进行[3]。所有患者均在服药前抽取静脉血2～3mL，将分离后的血清分成2份，分别用HPLC法与FPIA法测定其药物的稳态谷浓度。 1.2 仪器与试剂 使用仪器主要包括Intergral-100 HPLC系统（美国Perkin-Elmer公司），TDxFLx荧光偏振免疫分析仪（美国雅培公司），LG10-3A高速冷冻离心机（北京医用离心机厂），xw-80A旋涡混合器（上海医科大学仪器厂），AG285电子分析天平（瑞士梅勒公司）等。 检验所用的PT、PB、CBZ均由中国药品生物制品检定所提供，内标物采用自制安眠酮。乙醚和甲醇分别为分析纯乙醚和色谱纯甲醇；FPIA法均使用雅培公司所生产的配套试剂盒、标准曲线盒、质控盒。 1.3 HPLC 1.3.1 色谱条件 色谱柱：Hypersil ODS柱（250mm× 4.6mm，5μm），流动相采用甲醇-水（60?40），柱温30℃，检测波长254nm，流速为1.0mL/min，进样量20μL。 标准储备液制备：采用电子分析天平称取CBZ、PT、PB及安眠酮，用色谱纯甲醇作为溶剂制备成浓度为100μg/mL的内标液及标准贮备液，放入4℃冰箱内贮存。 1.3.2 血清样品处理 取0.1mL血清样品至10mL离心管内，加15μL内标液漩涡混合2min；加入乙醚2mL后再旋涡混合5min。然后在1500r/min转速下离心5min，将上清液1.5mL置于45℃水浴中，并于N2流下挥干，所得的残渣加入流动相150μL后旋涡混合5min，再在4000r/min转速下离心5min，取20μL上清液进样分析。相同色谱条件下，待测物的分析不受空白血清提取物的干扰，得到PB、PT、CBZ及内标液的保留时间依次为4.2、5.4、6.3、7.8min。 1.3.3 制备标准曲线 用电子分析天平量取适当CBZ、PT、PB的标准制备液（浓度100μg/ml），放入N2流及45℃水浴中挥干，再精密加入空白血清0.1mL、内标液15μL，进行2min漩涡混合，按照1.3.2中的方式测定。线性回归分析时，横坐标X为药物浓度，纵坐标Y为药物与内标峰面积之比，得到回归方程为YCBZ=0.0009+0.1054X（r=0.9993），线性范围1.4～23.0μg/mL；YPT=0.0112+0.0189X（r=0.9992），线性范围5.5～39.0μg/mL；YPB=0.0048+0.0169X（r=0.9995），线性范围5.5～61.0μg/mL。 1.3.4 回收率及精密度试验 分别制备低、中、高3种浓度的