PRF联合nHA对犬牙槽嵴裂修复动物实验.docVIP

PRF联合nHA对犬牙槽嵴裂修复动物实验摘要：目的 比较纳米羟基磷灰石（nHA）配合富血小板纤维蛋白（ PRF）与单独使用纳米羟基磷灰石，对犬牙槽突裂的修复效果。方法 选取12只健康成年犬， 采用自身对照的方法。在全麻下拔除狗的上颌左右侧门齿，模仿人体牙槽突裂，制作一宽4mm，长5mm，深6mm的楔形骨缺损区，关闭创口，喂养8w后，放入不同的填充材料，右侧为实验组， 填充nHA与PRF混合物，左侧为对照组，填充PRF，分别于4、8、12w处死动物各4只， 获取完整动物标本，行大体观察及组织学染色检查， 测量新生骨面积。结果 术后4、8、12w实验组新生骨面积大于对照组，差异有统计学意义（ P0.05）。结论 nHA与PRF配合，有促进牙槽突裂修复的作用。 关键词：富血小板纤维蛋白；纳米羟基磷灰石；牙槽突裂 牙槽突裂是唇裂畸形患者的常见并发症，尤其是单侧或双侧的完全性唇裂。修复牙槽突裂对于维持上颌骨连续性，促进颌骨发育，诱导恒牙萌出，改善发音有重要意义。对于如何增加骨量，解决患者牙槽突裂，成为当前的研究热点。因此，本实验建立狗的牙槽突裂模型，观察不同的植入材料对牙槽突裂骨组织修复的效果，为临床应用提供可靠资料。 1 资料与方法 1.1一般资料 选择健康杂种狗12只，无全身及口腔疾病，4～5个月龄，体重12～14kg，雌雄不分，随机分为三组，每组4只。 1.2试剂和器材 纳米羟基磷灰石（遵义医学院材料中心提供，孔隙率80% ，孔径100～500μm）、BI2000 型图像分析系统（中国四川） 等。 1.3方法 1.3.1 PRF的制备 采用一次离心的方法， 手术前用真空采血管采血15mL，立即在离心机上以3000r/min离心10min，得到上层的乏血小板血浆（platelet poor plasma， PPP），中间层的PRF与下层的红细胞。弃掉上层液体，得到淡黄色凝胶状PRF，用剪刀剪成1×2mm大小颗粒状，与nHA按1：1比例混匀，备用。 1.3.2实验方法 犬全身麻醉、侧卧固定、保持张口度，常规消毒、铺巾。牙龈分离器分离犬上颌左右侧门齿的牙龈，小心拔除。用高速涡轮机在拔牙窝处制作一宽4mm，长5mm，深6mm的楔形骨缺损区，建立牙槽突裂动物模型，关闭创口，喂养8w，再次手术，打开后放入不同的填充材料，右侧为实验组， 填充nHA与PRF混合物，左侧为对照组，填充PRF，术后青霉素肌注3d预防感染。分别于4、8、12w处死动物各4只， 获取完整动物标本，行大体观察及组织学染色检查， 测量新生骨面积。 1.4观察指标 1.4.1组织学检查 在距种植体周骨缺损区 5mm处取材，经10%福尔马林固定， 50mL/L硝酸脱钙， 梯度酒精、丙酮脱水，石蜡包埋，连续切片，HE染色，光镜观察。 1.4.2新生骨定量分析 在每组各个时间段的同一部位随机取3张组织学切片， 在光学显微镜下（*100）观察新生骨生成情况， 采集图像，导入计算机图像分析系统， 每张切片采集上下左右及中心区共5 个视野， 测量每个视野下新生骨组织面积，计算与缺损重建区总面积的百分比，结果进行统计学分析。 1.5统计学处理 组织形态学数据采用 SPSS16.0软件进行统计分析， 用配对 t检验对实验组与对照组结果进行处理，计量资料以（x±s）表示，P0.05表示有显著差异。 2 结果 2.1大体观察 所有犬均无死亡或炎性反应等并发症发生。伤口愈合好，随着时间的延长，牙槽嵴裂凹陷逐渐减小，同一时期中，实验组伤口愈合比对照组更平实。 2.2组织学观察 术后4w时，犬牙槽嵴裂处新骨开始生成， 实验组大立方形成骨细胞覆盖在已经形成的类骨质周围，有大量成纤维细胞和毛细血管，少量淋巴细胞、破骨细胞、巨噬细胞和中性粒细胞，新生骨呈条索状；对照组与之相似， 但纤维成分多、细胞成分少、毛细血管稀疏， 新生骨少，呈点状分布。术后8w时，犬牙槽嵴裂处新骨形成活跃，实验组新生骨粗大致密， 融合成网状， 成骨细胞及血管依然较多，对照组成骨细胞及血管较少，新生骨稀疏较，排列不规则。术后12w犬牙槽嵴裂处的成骨细胞开始变为小，成为骨细胞，陷入骨基质中，新生骨开始矿化成熟，实验组骨基质中骨细胞多而致密，新生骨融合成片，板状骨开始出现；对照组的骨基质中骨细胞少，新生骨面积较小、分布不均，板状骨少见。 2.3新生骨定量分析 术后4、8、12w实验组新生骨面积百分比大于对照组， 两组比较，差异有统计学意义（P0.05），见表 1。 3 讨论 修复牙槽突裂的骨移植材料，常用的有自体骨、异体骨、人工骨等。自体骨有不会产生免疫排斥反应，临床效果好，是移植材料的”金标准”，但是常常有获取量有限，塑性困难等缺点