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医院感染鲍曼不动杆菌同源性研究 　　【摘 要】目的：了解我院各病房鲍曼不动杆菌的分子流行特征，分析其基因同源性，为医院感染控制提供实验室依据。方法：收集梅州市人民医院各病房分离的76株院内感染的鲍曼不动杆菌，采用多位点序列分型（multilocus sequence typing， MLST）技术，PCR扩增gltA、gyrB、gdhB、recA、cpn60、gpi和rpoD七个管家基因片段，测序结果与PubMLST数据库对比分析，利用eBURST软件绘制不同基因型之间的进化关系图。结果：76株鲍曼不动杆菌可被分为4个基因型，分别是ST-136（21株）、ST-195（7株）、ST-208（38株）和一个新的基因型（10株），其中ST136、ST195和ST208基因型具有同源相关性。结论：我院内各病房的鲍曼不动杆菌具有水平传播特征，应用多位点序列分型技术可用于临床鲍曼不动杆菌的基因分型。 【关键词】鲍曼不动杆菌；医院感染；同源性；多位点系列分型技术 【中图分类号】R440 【文献标识码】A 【文章编号】1004-7484（2013）06-0346-02 鲍曼不动杆菌常常引起多种医院获得性感染，如呼吸道感染、败血症、泌尿道感染和伤口感染等。其中ICU病房的患者均为重症患者，大多数免疫力低下伴多脏器衰竭，是鲍曼不动杆菌的主要易感人群之一[1]。随着临床大量广谱抗生素的不合理使用，鲍曼不动杆菌多重耐药现象日益严峻，特别是亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌的出现和蔓延给临床抗感染治疗带来挑战[2]，如何控制亚胺培南耐药鲍曼不动杆菌的院内传播成为医院感染防控工作亟待解决的难题。 因此，分析鲍曼不动杆菌的分子的流行特征，检测不同菌株间的基因同源相关性，探寻亚胺培南鲍曼不动杆菌在医院内的水平传播途径具有重要意义。本研究收集76株2009年6月至2012年9月梅州市人民医院各病房分离的院内感染的亚胺培南耐药的鲍曼不动杆菌，采用多位点序列分型技术检测每株细菌的基因型别，分析其基因同源相关性，为切断泛耐药鲍曼不动杆菌的医院内传播提供实验室依据。 1材料与方法 1.1 菌株来源 2009年6月至2012年9月梅州市人民医院所有临床送检的标本培养为鲍曼不动杆菌的病例，送检标本包括痰液、创面分泌物、血液、中段尿液、侵入性操作的导管、脓液等。菌株以干纸片-76℃低温保存，临用前复苏。 1.2 菌株鉴定标准 细菌的分离、培养及鉴定流程均严格参照卫生部医政司《全国临床检验操作流程》来进行，获得纯菌后，采用法国生物梅里埃公司全自动鉴定仪VITEK-32系统及其配套药敏测定板测定其MIC值。MZA琼脂使用法国生物梅里埃公司产品。 1.3制备提取细菌DNA模板 采用煮沸法提取细菌总的DNA模板（质粒DNA和基因组DNA）：从分离平板上挑取一单克隆菌落，加200μ1无菌水于上述沉淀中，剧烈振荡，重悬细菌； 100℃水浴和-76℃各5min，反复冻溶5次；12000 rpm离心2分钟，上清液即为DNA提取液； 1.4 引物的设计与合成 3讨论 尽管国内外目前已有不少关于院内感染鲍曼不动杆菌的研究报道，但是由于各地区、医院的气候、环境、设备、消毒、病种、治疗等的差别，使得鲍曼不动杆菌感染的临床表现、药物选择、预后均颇有差异。因此掌握某一地区、某一时期甚至某一医院的院内感染鲍曼不动杆菌的临床特征及耐药情况，为指导本地区、本医院的预防和治疗有着非常大的现实意义。 鲍曼不动杆菌是条件致病菌，常可定值在正常人体，当机体抵抗力低下时也可造成感染，对人体产生破坏作用。近年来，鲍曼不动杆菌造成的院内感染逐年加重，而且随着抗生素的应用。其耐药性正逐年增强，国内已经有对除多粘菌素外所有临床使用的抗菌药物均耐药的鲍曼不动杆菌导致爆发性感染的报道[4]，具有高定植、高致病、强粘附及抗酸碱的特点，给临床工作带来了很大的挑战。 对鲍曼不动杆菌进行基因分型可以分析不同基因型之间的同源性关系，有助于了解鲍曼不动杆菌的分子流行特征，能够及时发现医院鲍曼不动杆菌的暴发流行，从而为医院感染控制提供实验室依据。 多位点序列分型（MLST）是一种通过对多个管家基因的部分DNA序列测序，来发现菌株变异的分型方法。MLST一般测定7个管家基因的部分DNA序列，根据每一序列的序列特异性赋予一个特定的等位基因编号，每一菌株7个管家基因的7个特异性编号即构成该菌株的序列型（sequencetype，ST）。 该MLST分型系统目前报道了5个克隆复合体，其中克隆复合体1、2和3分别对应欧洲l、2和3型克隆。l型克隆复合体又包含了l、7、8、19和20型共5个序列型。其中序列7、8、19和20型相互之间各存在2个核苷酸的序