体积排阻色谱鄄电感耦合等离子体质谱分析富硒大米含硒-分析化学.PDF

第4 1 卷 分析化学 (FENXI HUAXUE)摇 研究报告 第6 期 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 2013 年6 月 Chinese Journal of Analytical Chemistry 882 ~887 DOI:10.3724/ SP.J.1096.2013.20845 体积排阻色谱鄄电感耦合等离子体质谱分析 富硒大米含硒蛋白组成 方 勇摇 杨文建摇 马 宁摇 汤晓智摇 陈曦摇 胡秋辉* (南京财经大学食品科学与工程学院,江苏省粮油品质控制及深加工技术重点实验室,南京2 10046 ) 摘摇 要摇 建立体积排阻色谱鄄电感耦合等离子体质谱(SEC鄄HPLC鄄ICP鄄MS )联用技术分析富硒大米含硒蛋白 组成方法。 通过水提、盐提、碱提和醇提方法提取,并用丙酮沉淀蛋白,硒的回收率分别为9.6% ,16.8% , 48.2% 和14 .9% ,纯化后的蛋白结合硒的量由大到小依次为碱溶谷蛋白球蛋白醇溶蛋白清蛋白。 蛋白液 78 经SEC鄄HPLC鄄ICP鄄MS 检测,通过蛋白色谱峰(姿=280 nm )和ICP鄄MS 硒峰( Se )对比分析,利用分子量标准 曲线测定出4 类蛋白中含硒蛋白的分子量。 结果表明,富硒大米中清蛋白和醇溶蛋白并不是硒的主要存在蛋 白。 硒主要存在于7 kDa 的碱溶谷蛋白和球蛋白,其中碱溶含硒蛋白主要组分F1 分子量为199.8 kDa 。 关键词摇 体积排阻色谱;高效液相色谱;电感耦合等离子体质谱;大米;含硒蛋白 1摇 引摇 言 稻米是世界上的主要粮食之一,全世界一半以上人口以大米为主食。 大米蛋白是谷类蛋白中的最 佳蛋白,被公认为优质的食品蛋白。 蛋白质在大米中含量一般为5% ~8% ,胚乳中蛋白可分为4 类:谷 [1] 蛋白(80% 以上),清蛋白(4% ~9% ),球蛋白(10% ~11% )和醇溶谷蛋白(2% ~4% ) 。 硒(Se)是人和动物的必需微量元素之一, 在防癌、抗癌,预防和治疗心血管疾病、克山病和大骨节病 [2] 等方面的重要作用已为世人所公认 。 近年来,硒的研究重点逐渐从总硒转移到有机硒的研究。 其中, [3 ] 硒蛋白已成为研究热点之一 。 国内外十分重视大米蛋白的研究和开发利用,而对于富硒大米蛋白的 [4] 研究较少。 Xu 等 发现富硒大米的水提物具有较好的抗氧化活性,并与硒的含量成剂量关系;Fang [5] 等 通过提取大米中4 类蛋白,分析蛋白中硒的含量,发现硒主要存在于碱溶谷蛋白中。 [6] 富硒大米中硒主要以硒代甲硫氨酸(SeMet )存在于蛋白链中 。 为了认识富硒大米在体内体外所 表现的活性机理,需要进一步明确富硒大米中含硒蛋白的具体组成。 因此探讨富硒大米含硒蛋白组成, 有利于进一步评价含硒蛋白的生物有效性及其功能研究。 高效液相色谱鄄电感耦合等离子体质谱 (HPLC鄄ICP鄄MS)联用技术在硒的形