南京大学 分子生物学 课件 第18讲.ppt

第五节 基因表达的时序调控 时序调控： 基因转录时序调控的必要性 基因转录时序调控的方式 一、噬菌体基因表达特点概述 （一）噬菌体基因组构成 1，基因构成 （1）转录和翻译所必需的基因 （2）DNA复制相关基因 （3）噬菌体颗粒结构和装配相关基因 2，遗传图谱的特点 （二）溶菌周期的分期 1，早期感染（early infection） 2，晚期感染（late infection） （三）噬菌体基因表达的级联式控制 1，第一阶段的基因表达 2，第二阶段的基因表达 3，晚期基因表达 二、枯草杆菌中σ亚基的更迭 （一）枯草杆菌噬菌体SPO1早、中晚期基因表达的转换 1，SPO1生活史 （1）早期 （2）中期 （3）晚期 2，SPO1早、中、晚期基因表达过程中σ亚基的替换（图8－16） （1）含σ55的RNA聚合酶全酶负责早期基因的转录 （2）含gp28的RNA聚合酶全酶负责中期基因的转录 （3）以gp33-gp34为σ亚基的RNA聚合酶全酶负责晚期基因的转录 （二）枯草杆菌子孢子生成过程中σ亚基的替换 1，枯草杆菌不同生长时期σ亚基的替换 2，不同σ亚基识别不同的启动子 3，不同σ亚基的作用机制? 二、T7噬菌体生长过程中用噬菌体RNA聚合酶代替寄主的RNA聚合酶 （一）T7 噬菌体概况 1，T7噬菌体的特点 2，T7 噬菌体生长周期 （二）T7 噬菌体的基因 1， T7 噬菌体基因及其产物 （1）早期及晚期基因（图8－19） （2） T7 噬菌体基因的启动子位置和终止位点（图8－19） （3）T7噬菌体基因mRNA的合成及转录后处理（图8－20） 2，T7噬菌体RNA聚合酶识别的启动子（表8－6） （1） T7噬菌体RNA聚合酶识别的序列 （2） T7噬菌体的弱启动子 （3） T7噬菌体的强启动子 （三）T7 噬菌体基因表达的调控 1，早期转录产物I的形成 （1）寄主RNA合成体系负责转录早期基因 （2）重要的早期基因 2，第Ⅱ组基因的表达 （1）基因2 （2） 3.5基因产物 （3）T7 噬菌体对寄主RNA合成体系的接管 3，第Ⅲ类启动子的转录 （1）可能由于基因3.5产物的作用，这个阶段转录水平下降 （2）只有第III类强启动子才能起始转录 三、?噬菌体早、晚期基因转录以及裂解生长和溶原生长的调控 （一）?噬菌体基因表达的特点 1，对寄主RNA聚合酶的依赖性 2，有多种调控因子 3，功能相关的基因聚集形成4个操纵元 （1）早期左向操纵子 （2）早期右向操纵子 （3）晚期操纵子 （4）阻遏蛋白操纵子 （二）?噬菌体的早、晚期基因的表达（图6-17） 1，极早期基因 2，迟早期基因 3，晚期基因 （三） ?噬菌体的阻遏蛋白及其作用 1，Cro蛋白 （1）与操作子结合的亲和力 OL3 OL2 OL1 OR3 OR2 OR1 （2）功能 溶菌生长的初期，Cro蛋白先与OR3结合，关闭cI基因的活性，同时允许两个早期操纵元的转录 溶菌生长的晚期，Cro蛋白占据两个早期操纵元的操作子，关闭其转录。此时?噬菌体已经产生了足够的与DNA复制有关的蛋白质（O，P）和抗终止因子Q。从而使晚期基因得以表达 2，CI蛋白 （1）与操作子结合的亲和力 OL1 OL2 OL3 OR1 OR2 OR3 （2）功能 可以迅速占领两个早期操纵元的操作子，关闭早期操纵元，使噬菌体进入溶原生长状态 对其自身的启动子PM有正（低浓度时）、负（高浓度时）两种调控作用 （3）cI基因的突变效应 不能建立和维持溶原状态 （四） CII蛋白和CIII蛋白 1，CII蛋白 （1）CII蛋白的特点 A，以寡聚体形式起作用 B，促进启动子PE、PI和PaQ的转录 促进从启动子PE （在cro基因和cII基因之间）转录cI基因 促进从启动子PI转录整合酶基因 促进位于Q基因内部的启动子PaQ转录，阻遏Q基因的表达 （2）CII蛋白调控的启动子的特点 没有典型的-10和-35序列 有CII蛋白结合位点：位于-35序列两侧，具有四碱基对正向重复序列TTGCNNNNNNTTGC CY突变体：有一类是由于PE启动子中的CII蛋白结合位点突变，造成CII蛋白不能结合， ?噬菌体不能建立溶原状态 2，CIII蛋白 CIII蛋白的功能：抑制hfl基因产物的蛋白水解酶活性 3， ?噬菌体cII、cIII基因突变效应 ?噬菌体不能建立溶原状态，但不影响已建立的溶原状态的维持 （五）抗终止因子及其作用（P206） 1，N蛋白 （1）作用位点（图6-17） nutL：紧接着PL ，位于N基因开头 nutR：紧靠tR1，位于Cro基因末尾 （2）作用机制 pN生成以后，首先结合于nut位点 当RNA聚合酶转录通过nut位点时，pN便与RNA聚合酶结合 通过修饰改变RNA聚合酶构象