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六神丸血浆药物化学的研究 　　摘要：为建立中药复方六神丸血浆药物化学的研究方法，利用HPLC-UV技术分析比较了空白血浆、体内六神丸血浆和体外六神丸血浆样品成分的异同，鉴定了灌服六神丸后大鼠血浆中移行成分及其代谢产物的变化；检测了不同时间点体内六神丸血浆中成分的含量；测定了六神丸中对应成分的标准品入血后，转化为目标峰12号物质的转化率。结果表明：大鼠灌胃六神丸后，HPLC图显示15个入血成分，其中10个成分为新产生的代谢产物，5个成分可能为六神丸所含成分的原型；六神丸经大鼠体内代谢后，在血浆中被检测到的主要成分11号和12号移行成分，有良好的浓度-时间依赖性；六神丸中主要成分华蟾酥毒基、酯蟾毒配基、蟾毒灵、蟾毒它灵均转化成12号类移行成分，且12号成分的转化率为：7.48%、2.93%、0.55%、0.94%。说明了大鼠灌胃六神丸后的血中移行成分及其代谢产物，可能为六神丸在体内发挥作用的活性物质群；而六神丸入血后的代谢变化规律，将为进一步研究六神丸有效成分及作用机理奠定基础。 　　关键词：六神丸；血浆药物化学；药物代谢；HPLC 　　中图分类号： R285.5 　　文献标识码：A文章编号2017 　　1引言 　　六神丸是一种拥有100多年历史，享誉国内外的著名中成药。六神丸由六味药材配置而成，包括牛黄、珍珠、蟾酥、明雄黄、麝香、冰片。其具有清热解毒、消肿止痛的作用[1，2]，应用于咽喉肿痛、痈疡疔疮等。现代中药开发中，将六神丸应用于更多疾病，如消炎、镇痛、抗肝癌、抗肿瘤等[3～6]。对于六神丸成分的分析，曹阳等有相关报道[7～9]。本文基于对六神丸HPLC图谱的分析，旨在建立六神丸血浆药物化学的研究方法，从而为探究六神丸有效成分及其作用机制奠定基础。 　　目前对于中药复方六神丸的有效成分研究过于分散而缺乏系统性，仍不能明确有效的物质基础。中药血浆药物化学以中药口服后含药血浆为对象，综合应用多种现代技术，分析鉴定含药血浆中的移行成分，包括中药原型成分及其代谢产物，以研究中药在体内发挥作用物质 [11]。药物无论经过何种代谢必须由给药部位进入血液循环，以血液为介质输出到靶点，从而产生作用，中药亦是如此。药物进入血液可能是其原形化合物，也可能是其代谢产物，还有可能是机体应激产生的活性物质发挥药效[12～15]。本实验通过对比分析空白血?{、体内六神丸血浆、体外六神丸血浆、体内标准品血浆以及体外标准品血浆的HPLC-UV图谱，研究六神丸进入血液后的原形药物及其代谢成分的变化状况。以此逆向追溯六神丸药效活性物质群，有助于建立六神丸基于生物效应的品质评价指标。 　　2材料与试剂 　　2.1仪器 　　仪器选用分析型高效液相色谱仪（Ultimate 3000 Pump、Ultimate 3000 Auto sampler、Ultimate 3000 Column Compartment、Ultimate 3000 Diode Array Detector） 　　2.2试剂 　　试剂包括：六神丸（上海雷允上药业有限公司，批号：140701），5-羟色胺盐酸（中国食品药品鉴定研究院，批号：111656），华蟾毒它灵（上海源叶生物科技有限公司，批号：p24N7F25514），蟾毒它灵（上海源叶生物科技有限公司，批号：p12O7F22619），蟾毒灵（上海源叶生物科技有限公司，批号：W05D6Z7090），华蟾酥毒基（上海源叶生物科技有限公司，批号：W10O7Z22424），酯蟾毒配基（上海源叶生物科技有限公司，批号：PJ0727RB13）。乙腈为色谱纯，乙酸乙酯（国药 AR），其他试剂均为分析纯。 　　2.3动物 　　健康雄性SD大鼠，体重220 g左右[湖北省实验动物研究中心，许可证号：SCXK（鄂）2015-0018]。动物实验员操作证号：T 　　3方法 　　3.1六神丸灌胃药液及标准品灌胃药液的制备 　　将六神丸研磨成粉，称取一定量六神丸粉末，配制成8.0 mg/mL的水溶药液，超声30 min，使其充分溶解，于4 ℃冰箱保存，备用。 　　将华蟾酥毒基、酯蟾毒配基、蟾毒灵、蟾毒它灵、华蟾毒它灵配制成1 mg/mL的水溶液，超声30 min，使其充分溶解，于4 ℃ 冰箱保存，备用。 　　3.2体内六神丸血浆样品和空白血浆样品的制备 　　空白血浆的制备：健康SD大鼠4只，禁食12 h，灌胃生理盐水，在1 h后，将每只大鼠摘眼球取血，各5 mL以上，置于含肝素钠抗凝剂的离心管内，备用。 　　体内六神丸血浆样品制备：健康SD大鼠3只，禁食12 h，灌胃六神丸水溶液（36.0 mg/kg）约1 mL，给药1 h后，每只大鼠摘眼球取血5 mL以上，置于含肝