天津大学,生物化学,,ppt十二节.pptVIP

第四节 RNA的生物合成 一、DNA指导下的RNA合成－转录1 一、DNA指导下的RNA合成－转录2 （一）大肠杆菌RNA聚合酶1 （一）大肠杆菌RNA聚合酶1 （二）RNA聚合酶催化的转录过程 1．RNA聚合酶与模板DNA结合1 1．RNA聚合酶与模板DNA结合2 1．RNA聚合酶与模板DNA结合3 2．起始1 2．起始2 3．延伸1 3．延伸2 4．终止1 4．终止2 5．原核生物的转录过程 （三）RNA的转录后加工 （三）RNA的转录后加工 1．原核生物RNA转录后加工1（mRNA） 1．原核生物RNA转录后加工2（rRNA1） 1．原核细胞RNA转录后加工2（rRNA2） 1．原核生物RNA转录后加工3（tRNA1） 1．原核生物RNA转录后加工3（tRNA2） 2．真核生物RNA转录后加工1（rRNA1） 2．真核生物RNA转录后加工2（rRNA2） 2．真核生物RNA转录后加工3（rRNA3） 2．真核生物RNA转录后加工4（tRNA1） 2．真核生物RNA转录后加工5（tRNA2） 2．真核生物RNA转录后加工6（mRNA1） 2．真核生物RNA转录后加工7（mRNA2） 2．真核生物RNA转录后加工8（mRNA3） 2．真核生物RNA转录后加工9（mRNA4） 2．真核生物RNA转录后加工10（帽子结构形成过程） 二、RNA指导下的RNA合成－RNA复制 三、依靠反转录的DNA生物合成1 三、依靠反转录的DNA生物合成2 第五节 基因的重组与DNA“克隆” 第五节 基因的重组与DNA“克隆”2 一、DNA重组技术的用途 二、重组中的酶及载体 （一）DNA体外重组中常用的酶1 （一）DNA体外重组中常用的酶2 （一）DNA体外重组中常用的酶2 （一）DNA体外重组中常用的酶2 （一）DNA体外重组中常用的酶2 （一）DNA体外重组中常用的酶3 （一）DNA体外重组中常用的酶4 （一）DNA体外重组中常用的酶5 （二）载体（总） 1．定义 2．载体必须具备如下条件 3．目前常用的载体1（总） 3．目前常用的载体1（总） 3．目前常用的载体2（λ噬菌体为载体） 三、重组的步骤1 三、重组的步骤1DNA与载体相连接 三、重组的步骤2转化与筛选 三、DNA表达的一般步骤1 三、DNA表达的一般步骤2 1．目的基因的取得－分离法、合成法 2．外源DNA与载体连接形成重组DNA1 2．外源DNA与载体连接形成重组DNA2 2．外源DNA与载体连接形成重组DNA3 2．外源DNA与载体连接形成重组DNA4 2．外源DNA与载体连接形成重组DNA5 3．将重组DNA引入受体细胞 4．重组体的筛选1 4．重组体的筛选2 插入失活 4．重组体的筛选3 5．表达 （2）平头末端连接 ＋ T4DNA连接酶 （DNA浓度低） T4DNA连接酶 （DNA浓度很高） T4DNA连接酶 （DNA浓度低） （3）互补均聚寡核苷酸末端间的连接 5 ’外切酶 3 ’ 5 ’ 3 ’ 5 ’ 3 ’ 5 ’ 3 ’ 5 ’ 3 ’ 3 ’ 3 ’ 3 ’ 末端核苷酸转移酶 AAAA AAAA TTTT TTTT +dATP +dTTP DNA po1I/ DNA连接酶 （4）用接头连接 GAATTC CTTAAG GAATTC CTTAAG 载体 待插入的DNA 合成的接头 （10聚体） T4DNA连接酶 GAATTC CTTAAG GAATTC CTTAAG EcoRI EcoRI G AATTC CTTAA G AATTC G G CTTAA 退火、连接 GAATTC GAATTC CTTAAG CTTAAG 重组体DNA 通过转化、转导、转染等方式 （1）化学法、氯化钙法等 （2）电击法 （3）显微注射法 卵清蛋白基因产生mRNA的过程： 转录 1 2 3 4 5 6 7 A B C D E F G 卵清蛋白基因(7700个核苷酸) 1 2 3 4 5 6 7 A B C D E F G L L 5’ 3’ 加帽子和尾巴 1 2 3 4 5 6 7 A B C D E F G L 5’ 3’ 内含子RNA的除去 和拼接作用 12345 6 7 L CAP PolyA尾 成熟