【精选】抗辐射球菌pprI基因活体电转染救治小鼠_射线损伤的实验研究_陈婷婷.pdf

第 28 卷 第 3 期 辐 射 研 究 与 辐 射 工 艺 学 报 Vol.28, No.3 2010 年 6 月 J. Radiat. Res. Radiat. Process. June 2010 抗辐射球菌 pprI 基因活体电转染救治小鼠γ 射线损伤的 实验研究 陈婷婷 连利霞 牟 英 杨占山 （苏州大学放射医学与公共卫生学院放射毒理教研室 苏州 215123 ） 摘要 为研究抗辐射球菌 pprI 基因活体电转染对哺乳动物急性放射损伤的影响，探讨一种新的救治放射损伤 的转基因技术。将自行构建的 pCMV-HA-pprI 质粒注入接受 γ 射线照射的小鼠肌肉内，采用活体基因电转导 技术将该基因导入细胞内，观察照后第 1、7、14、28 和 35 天小鼠死亡率、血细胞计数以及骨髓细胞、脾脏 和胸腺淋巴细胞凋亡的变化。结果显示，6Gy γ 射线可引起小鼠急性致死性放射损伤，转基因组小 鼠死亡率（ 1/10 ）明显低于单纯照射组小鼠死亡率（4/10 ）。与单纯照射组和空载体转染组比较，pprI 基因 转染组小鼠外周血白细胞总数及红细胞总数于照后第 7 天显著增高（p 0.05 ）；血小板数于第 7、14 天显著增 高（p 0.05 ）；血淋巴细胞百分率于照后35 天恢复正常；pprI 基因转染组脾细胞凋亡率于第 7、14、28 天显著 降低（p 0.05 ）；胸腺细胞凋亡率于第 1、7、14、35 天显著降低（p 0.05 ）；骨髓细胞凋亡率于第 1、7、14 和 抗辐射菌 pprI 28 天显著降低 （p 0.05 ），并且胸腺细胞和骨髓细胞凋亡率均于照后 28 天恢复正常。 结果表明， 基因活体电转染对动物急性致死性放射损伤具有明显的防治作用。 关键词 抗辐射球菌，pprI ，转基因，放射损伤，治疗 中图分类号 R811.5 ，R818.74 ，R818.059 抗辐射球菌(Deinococcus radiodurans) 由美国 抗辐射损伤作用[9] 。然而，该基因对γ 射线急性损伤 科学家 Anderson[1]等首次从辐射灭菌后变质的肉类 的抗放作用及其机理，目前尚未见文献报道。为了 罐头中分离出来，其对电离辐射、紫外线、干燥等 解决这一问题，本实验应用基因活体电转染技术， 因素引起的致死和致突变性 DNA 损伤具有极端抗 研究 pprI 基因对哺乳动物急性γ射线放射损伤中的 性[2,3]，指数生长期的抗辐射球菌能够在超过 17 kGy 防治作用及可能的机制。 的γ 射线照射下存活且不发生突变，抗性是大肠杆 菌的 100 多倍[4]，它是迄今为止地球上发现的辐射 1 实验材料与方法 抗性最强的生物之一[5,6]，因此引起了科学家的广泛 1.1 实验材料 关注。近年来，通过研究发现，抗辐射球菌中的 pprI [9] ；无内毒 基因是一个能够促进细胞体内 recA 、pprA 等直接参 质粒 pCMV-HA-pprI 由实验室构建 与 DNA 损伤修复基因表达的开关基因，在抗辐射 素质粒大量抽提试剂盒购自 QIAGEN 公司；凋亡试 球菌的极端抗性中起重要作用。该基因生成的 PPRI 剂盒购自 Invitrogen 公司；ECM830 型活体基因导 蛋白能够刺激辐射后的 recA 、pprA 基因转录增加， 入仪购自美国 BTX 公司；Cytomics FC500 型流式