微生物实验课件全部.ppt

实验一 实验室环境和人体表面微生物的检查 二、基本原理 取自不同来源的样品接种于平板培养基上，在37℃下培养1～2天，每一菌体即能通过繁殖形成一个可见的细胞群体的集落——菌落。 每一种细菌所形成的菌落都有其特点，如菌落的大小，表面干燥或湿润、隆起或扁平、粗糙或光滑，边缘整齐或不整齐，菌落透明或半透明或不透明，颜色以及质地疏松或紧密等。 因此，可通过平板培养来检查环境中细菌的数量和类型。 三、实验器材 培养基 肉膏蛋白胨琼脂平板 溶剂和试剂 无菌水 仪器和其他用具 灭菌棉签（装在试管内），接种环，试管架，酒精灯或煤气灯，记号笔（或蜡笔），废物缸。 2．实验室细菌检查 　（1）空气 将一个肉膏蛋白胨琼脂平板放在当时做实验的实验室，移去皿盖，使琼脂培养基表面暴露在空气中；将另一肉膏蛋白胨琼脂平板放在无菌室或无人走动的其他实验室，移去皿盖。一小时后盖上两个皿盖。 　 （b）取棉签 左手拿含有棉签的试管，在火焰旁用右手的手掌边缘和小指、无名指夹持棉塞（或试管帽），将其取出（图Ⅰ-2），将管口很快地通过煤气灯（或酒精灯）的火焰，烧灼管口；轻轻地倾斜试管，用右手的拇指和食指将棉签小心地取出（图Ⅰ-2）。放回棉塞（或试管帽）（图Ⅰ-2），并将空试管放在试管架上。 （c）弄湿棉签 左手取灭菌水试管，如上法拔出棉塞（或试管帽）并烧灼管口，将棉签插入水中，再提出水面，在管壁上挤压一下以除去过多的水分，小心将棉签取出，烧灼管口，放回棉塞（或试管帽），并将灭菌水试管放在试管架上。 （d）取样 将湿棉签在实验台面或门旋钮上擦拭约2平方厘米的范围。 （e）接种 按图Ⅰ-2在火焰旁用左手拇指和食指或中指使平皿开启成一缝。再将棉签伸入，在琼脂表面顶端接种（滚动一下）（图Ⅰ-2），立即闭合皿盖。并按图Ⅰ-2将原放棉签的空试管拔出棉塞（或试管帽），烧灼管口，插入用过的棉签，将试管放回试管架。 （f）划线 另取接种环在火焰上灭菌，如图Ⅱ-4，先将环端烧热（图Ⅱ-4，1），然后将接种环提起垂直放在火焰上（图Ⅱ-4，2），以使火焰接触金属丝的范围广一些，待接种环烧红，再将接种环斜放，沿环向上，烧至可能碰到培养皿的部分，再移向环端，如此很快地来回通过火焰数次（图Ⅱ-4，3）。　 左手拿起平板，同样开启一缝，将灭过菌并冷却了的接种环（可在琼脂表面边缘空白处试温度，若发出溅泼声，表示太烫），通过琼脂顶端的接种区，向下划线，直到平板的一半处（图Ⅱ-3，C）。注意：接种环与琼脂表面的角度要小，移动的压力不能太大，否则会刺破琼脂。 闭合皿盖，左手将平板向左转动至空白处，右手拿的接种环再在火焰上烧灼，使冷。接种环 通过前面划的线条再在琼脂的另一半，按图Ⅱ-3，D从上向下来回划线至1／2处。 　 烧灼接种环，转动平板，按图Ⅱ-3，E，划最后1／4，立刻盖上皿盖，烧灼接种环，放回原处。 　 整个划线操作均要求无菌操作，即靠近火焰，而且动作要快。 3．人体细菌的检查 　（1）手指（洗手前与洗手后） （a）分别在两个琼脂平板上标明洗手前与洗手后（当然，班级、姓名、日期各项在每次写标签时是必不可少的）。 　（b）移去皿盖，将未洗过的手指在琼脂平板的表面，轻轻地来回划线，盖上皿盖。 　（c）用肥皂和刷子，用力刷手，在流水中冲洗干净，干燥后，在另一琼脂平板表面来回移动，盖上皿盖。 （2）头发 在揭开皿盖的琼脂平板的上方，用手将头发用力摇动数次，使细菌降落到琼脂平板表面，然后盖上皿盖。 （3）咳嗽 将去盖琼脂平板放在离口约6～8cm处，对着琼脂表面用力咳嗽，然后盖上皿盖。 （4）鼻腔 （a）按照实验台检查法的步骤（b）和（c），取出棉签，并将其弄湿。 （b）用湿棉签在鼻腔内滚动数次。 （c）按实验台检查法的步骤（e）和（f），接种与划线，然后盖上皿盖。 5．结果记录方法 （1）菌落计数在划线的平板上，如果菌落很多而重叠，则数平板最后1/4面积内的菌落数。不是划线的平板，也一分为四，数1/4面积的菌落数。 （2）根据菌落大小、形状、高度、干湿等特征观察不同的菌落类型。但要注意，如果细菌数量太多，会使很多菌落生长在一起，或者限制了菌落生长而变得很小，因而外观不典型，故观察菌落的特点时，要选择分离得很开的单个菌落。 菌落特征描写方法如下： 　　（a）大小 大、中、小、针尖状。可先将整个平板上的菌落粗略观察一下，再决定大、中、小的标准，或由教师指出一个大小范围。 　　（b）颜色 黄色、金黄色、灰色、乳白色、红色、粉红色等。 　　（c）干湿情况 干燥、湿润、粘稠。 　　（d）形态 圆形、不规则等。 （e）高度扁平、隆起、凹下。 　　（f）透明程度 透明、半透明、不透明。 　　（g）边缘 整齐、不整齐。 五、实验报告 六、思考题 (1)列举