助教小班指导课----高效液相色谱分析高效液相色谱法.PDF

第19章 高效液相色谱法 助教小班指导课 高效液相色谱分析 1 第19章 高效液相色谱法 第一节 概 述 高效液相色谱法是继气相色谱之后，70年代初期发展 来的一种以液体做流动相的新色谱技术。 高效液相色谱是在气相色谱和经典色谱的基础上发展 来的。现代液相色谱和经典液相色谱没有本质的区别。不同 点仅仅是现代液相色谱比经典液相色谱有较高的效率 和实 现了自动化 操作。经典的液相色谱法，流动相在常压下输 送，所用的固定相柱效低，分析周期长。而现代液相色谱法 引用了气相色谱的理论，流动相改为高压输送（最高输送压 7 力可达4.910 Pa ）;色谱柱是以特殊的方法用小粒径的填料 填充而成，从而使柱效大大高于经典液相色谱（每米塔板数 可达几万或几十万）；同时柱后连有高灵敏度的检测器，可 对流 2 第19章 高效液相色谱法 第一节 概 述 出物进行连续检测。因此，高效液相色谱具有分析速度快、 分离效能高、自动化等特点。所以人们称它为高压、高速、 高效或现代液相色谱法。 二、液相色谱分离原理及分类 和气相色谱一样，液相色谱分离系统也由两相—— 固定 相和流动相组成。液相色谱的固定相可以是吸附剂、化学键 合固定相（或在惰性载体表面涂上一层液膜）、离子交换树 脂或多孔性凝胶；流动相是各种溶剂。被分离混合物由流动 相液体推动进入色谱柱。根据各组分在固定相及流动相中的 吸附能力、分配系数、离子交换作用或分子尺寸大小的差异 进行分离。色谱分离的实质是样品分子（以下称溶质）与溶 3 第19章 高效液相色谱法 第一节 概 述 剂（即流动相或洗脱液）以及固定相分子间的作用，作用力 的大小，决定色谱过程的保留行为。 根据分离机制不同，液相色谱可分为：液固吸附色谱、 液液分配色谱、化合键合色谱、离子交换色谱以及分子排阻 色谱等类型。 三、液相色谱与气相色谱的比较 液相色谱所用基本概念：保留值、塔板数、塔板高度、 分离度、选择性等与气相色谱一致。液相色谱所用基本理论： 塔板理论与速率方程也与气相色谱基本一致。但由于在液相 色谱中以液体代替气相色谱中的气体作为流动相，而液体和 4 第19章 高效液相色谱法 第一节 概 述 气体的性质不相同；此外，液相色谱所用的仪器设备和操作 条件也与气相色谱不同，所以，液相色谱与气相色谱有一定 差别，主要有以下几方面： （1）应用范围不同 气相色谱仅能分析在操作温度下能气化而不分解的物 质。对高沸点化合物、非挥发性物质、热不稳定化合物、离 子型化合物及高聚物的分离、分析较为困难。致使其应用受 到一定程度的限制，据统计只有大约20%的有机物能用气 相色谱分析；而液相色谱则不受样品挥发度和热稳定性的限 制，它非常适合分子量较大、难气化、不易挥发或对热敏感 的物质、离子型化合物及高聚物的分离分析，大约占有机物 5 第19章 高效液