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目录 丙烯腈水合酶生产菌生长规律 丙烯腈水合酶生产菌生长规律 丙烯腈水合酶生产菌生长规律 丙烯腈水合酶生产菌生长规律 丙烯腈水合酶生产菌生长规律 目录 菌种筛选意义 自然分离筛选原理 自然分离筛选原理 目录 纯种培养的意义 纯种培养基本要点 目录 本章小结及思考题 * * LOGO * * LOGO * LOGO 培菌员岗位培训 丙烯腈水合酶生产菌生长规律 丙烯腈水合酶生产菌选育流程 工程菌纯种培养要点 本章思考题 菌体 形态 菌体 数量 生长 速率 代谢 情况 丙烯腈水合酶生产菌在发酵培养过程中 随着培养时间的延长 延迟期 对数期 稳定期 衰亡期 细胞个数 生长速率 延迟期 培养时间（hr） 0 （+） （-） 在发酵培养初期，菌种对新的培养环境有一段适应期，为细胞分裂繁殖进行准备。延迟期内菌种生长速率为0，菌种数量不增加，对不良环境敏感，菌体形态增大、变长。 延迟期生长代谢规律 细胞个数 生长速率 培养时间（hr） 延迟期 0 （+） （-） 对数期 菌种对培养环境适应后开始进入分裂繁殖阶段，菌种生长速率增大，并达到最大值，菌种数量成几何级数增长。抗不良环境的能力强，形态均匀，有明显的分裂横隔。在对数后期，菌体细胞开始合成丙烯腈水合酶。 对数期生长代谢规律 细胞个数 生长速率 培养时间（hr） 延迟期 0 （+） （-） 对数期 稳定期 随着培养基内营养物质消耗、有害代谢产物的累积，菌种开始出现衰亡。新繁殖的细胞数与衰亡细胞数逐渐相等，生长速度趋向于零，活菌数达到定值。菌种形态为均匀的颗粒型。稳定期内，菌体细胞大量合成水合酶，酶活迅速上升。 稳定期生长代谢规律 细胞个数 生长速率 培养时间（hr） 延迟期 0 （+） （-） 对数期 稳定期 衰亡期 随着外界环境对继续生长的菌体越来越不利，死亡率逐渐增加，以致死亡数大大超过新生数，群体中活菌数目急剧下降，出现了“负生长”。细胞开始出现膨大、自溶破碎。细胞内水合酶释放到细胞外，检测发酵液酶活性迅速下降。 衰亡期生长代谢规律 丙烯腈水合酶生产菌生长规律 丙烯腈水合酶生产菌选育流程 工程菌纯种培养要点 本章思考题 缩短培养周期 提高催化能力 降低能耗 减少发酵液用量 发酵生产中，菌种的优劣直接关系到发酵产品的质量与产量。 选育 优质菌种 减少单体杂质 子代 正变 母代 负变 变异后性状劣于母代 保留母代基本遗传性状 变异后性状优于母代 菌种在传代过程中，子代在保留母代的基本特性（遗传）的同时，其部分性状会发生变化（变异）；发生变异的子代其性状优于母代的为正变，反之为负变。 正变 自然分离筛选就是通过培养、检测等手段将菌种自然传代过程中出现的正变菌种挑选出来。并对正变菌种再次传代，通过检测挑选出遗传稳定性好的菌种加以保存。 二代 称为一代筛选菌种 挑选遗传稳定性优良 选取标准 各项指标达标 无其它杂菌污染 生产线使用效果好 出发菌种 性状检测 传代培养 扩大培养 稀释涂布分离 单菌株 一代菌种 二代菌种 可判定为单菌落 形态饱满光滑 菌落大小适宜 选取标准 检测项目 PH值7.5±0.5 生物量≥6.0% 菌种形态饱满 酶活性≥1100万 性状检测 保藏备用 稀释倍数106～108 试管斜面 固体培养 28±1℃ 120hr 试管斜面固体培养 28±1℃ 120hr 确保菌种优良性状 确保菌种遗传稳定 自然分离筛选流程 丙烯腈水合酶生产菌生长规律 丙烯腈水合酶生产菌选育流程 工程菌纯种培养要点 本章思考题 杂菌菌体被引入水合反应混合液 对产催化剂的影响 对单体质量的影响 增加单体溶液中大分子蛋白杂质的含量 产生原因 危害 杂菌消耗营养成分、释放有害代谢产物 影响生产菌的生长及产酶 在发酵生产中必须尽量避免杂菌污染；在菌种培养阶段就必须做到纯种培养，杜绝杂菌污染。 在菌种纯种培养过程中所用的玻璃器皿、接种工具、用品必须包扎好后，经高压蒸汽灭菌后方可使用（灭菌条件0.11MP、20min）。 培养基必须经高压蒸汽灭菌，并检测无杂菌后方可使用（灭菌条件0.11MP、20min）。 无菌操作室经紫外线照射、喷洒药物灭菌，在无菌检测达标后，方可进行接种操作。 所有接种操作必须在超净工作台内、高温火焰保护下的无菌区域内，严格按照无菌操作规定进行。 器具无菌 培养基无菌 环境无菌 操作无菌 丙烯腈水合酶生产菌生长规律 丙烯腈水合酶生产菌选育流程 工程菌纯种培养要点 本章思考题 菌种在不同阶段的生长及代谢规律？ 菌种筛选的意义？ 自然分离法筛选菌种的基本原理？ 自然分离法筛选菌种基本流程？ 无菌操作应注意哪几个环节？ 操作无菌的注意事项有哪些？