循环肿瘤细胞检测试剂盒叶酸免疫磁球说明书.pdfVIP

Cat:BHK 循环肿瘤细胞检测试剂盒 （叶酸免疫磁球） 说明书 【产品名称】循环肿瘤细胞检测试剂盒 （叶酸免疫磁球） 【包装规格】16测试/盒。 【预期用途】定量检测患者外周血中循环肿瘤细胞的个数。 【检验原理】外周血中的循环肿瘤细胞能与试剂盒中的叶酸免疫纳米磁 球特异性的结合，通过磁分离技术将其分离富集。然后经过DAPI、 anti-hMAM-FITC、anti-CD45-PE染色将捕获的细胞进行鉴定、计数。 【主要组成成分】抗-EGFR免疫纳米磁球（8测试/管，2管），DAPI细 胞核染色剂（1mL/管，1管）、肿瘤标记物anti-hMAM-FITC染色剂（1mL/ 管，1管）、白细胞共同抗原anti-CD45-PE （1mL/管，1管），洗涤缓冲 液 （80mL/瓶，2瓶），重悬缓冲液 （6mL/瓶，1瓶）。不同批号试剂盒中 各组分可以互换。 【储存条件及有效期】-20℃，避免反复冻融，有效期6个月。 【适用仪器】正/倒置荧光显微镜（配有紫外、蓝色、绿色三种荧光模块）， 如OLYMPUSI×71、B×61系列。 【样本要求】医用抗凝采血管采集7.5m 外周血，4℃保存，48h 内进行 测试。 【检验方法】 上海柏慧康生物科技有限公司 — ——1 具体操作步骤为： 1. 采血管中收集肿瘤患者7.5m 抗凝血液，1000rpm/min离心10min。 2. 小心取中上层液置于15mLEP管中后，加入与其等量的BufferA充分 混匀。 3. 加入磁珠120μ ，室温孵育30min，每10min混匀一次。 4. 将EP管插入磁分离架上吸附5min，吸弃上清液，EP管从磁分离架上 取出。 5. 向EP管中加入1mLBufferA颠倒混匀，然后将EP管插入磁分离架上 吸附5min，吸弃上清液，EP管从磁分离架上取出。 6. 加染色剂A30μ 、染色剂B30μ 、染色剂C10μ 混匀避光染色15min。 7. 染色结束后重复步骤5一次。 8. 向EP管中加入1m BufferB重复步骤5一次。 9. 向EP管中加入30μ BufferB重悬，混匀后的部分液体均匀涂于防脱 载玻片中心，待液滴干后用荧光显微镜下观察计数；另外10µl液体可 加入四通道微流控芯片中使用微流控多色荧光细胞计数仪进行CTC 个数统计。 【阳性判断值或者参考区间】细胞核DAPI 染色（蓝色荧光）阳性、 anti-hMAM-FITC染色 （绿色荧光）阳性、anti-CD45-PE （红色荧光）阴 性。细胞大小8μm。 【注意事项】 1. 检测前用200μ 缓冲液将冻干的免疫磁球溶解，使用前充分混匀。 上海柏慧康生物科技有限公司 — ——2 2. 于抗凝管中采集患者外周血，避免污染、溶血，离心取中上层液进 行检测。 3. 阳性对照品可按照操作步骤说明进行鉴定，判定标准与循环肿瘤细 胞判断标准相同。 【检验结果的解释】 1. 荧光符合循环肿瘤细胞判断标准，但其大小＜8μm时判为阴性。 2. 当三种荧光均为阳性时，判为阴性。 【检验方法的局限性】 【产品性能指标】 1. 磁球粒径：300±100nm； 2. 磁球分散度：PDI值≦0.5； 3. 磁球表面抗体活性维持效率≧80%； 4. 磁球肿瘤细胞捕货效率：≧80%； 5. 磁球、染色剂保存期6个月以上。 【注意事项】 1. 使用前请仔细阅读说明书，操作前请准备磁力架。 2. 操作人员应该严格按照实验室的相关规定进行试验操作，注意安 全。 3. 避免试剂对环境污染。 4. 试剂盒需要远离食物和饮用水。 5. 试剂中含有防腐剂ProClin300，应避免接触眼睛和皮肤。 上海柏慧康生物科技有限公司 — ——3 6. 如果误食，请立即就医。 【标示解释】 【参考文献】 1.Ashworth TR.A case of cancer in which cells similar to those in the tumors wereseeninthebloodafterdeath[J].AustMedJ,