贵州省蛇源曼氏迭宫绦虫结构及与宿主相容性的研究-病原生物学专业毕业论文.pdfVIP

前 言 曼氏迭宫绦虫[Spirometra mansoni （Joyeux et Houdemer,1928 ）成虫主要寄生 在终宿主猫、犬等的小肠内，偶可寄生于人体小肠，其中绦期幼虫裂头蚴可寄生 人体引起曼氏裂头蚴病（sparganosis mansoni ）[1]。裂头蚴（plerocercoid ）可侵 害人体诸多部位，造成的损害远较成虫大，严重威胁着人体健康。曼氏裂头蚴病 分布甚广，多见于东亚和东南亚的朝鲜、日本、印度尼西亚、菲律宾、马来西亚 和越南等国；美洲、非洲、澳洲及欧洲均有病例报道。该病从发现起至今国内外 病例报道不断呈现，目前，全球有 1400 多例病例报道，我国已有千余例的报道， 来自于27 个省（区、市）[2]。曼氏裂头蚴病是我国重要的人兽共患食源性寄生 虫病之一。 目前，国内外对其研究仍以病例报道、病例分析和中间宿主及保虫宿主体内 裂头蚴（plerocercoid ）感染的调查为主，随着生物化学、免疫学及蛋白组学等方 面技术在寄生虫病研究中的应用，曼氏裂头蚴病在病原学、流行病学及诊断学方 面取得一些进展，但在分子生物学、宿主相容性、疫苗及致病机制等方面的研究 较为薄弱，对不同虫株的形态结构以及生物学特性是否存在差异的研究尚为空白。 自2006 年起，我们课题组已逐步开展了曼氏裂头蚴病原的研究工作。首先 开展了我省部分地区野生青蛙和蛇裂头蚴感染情况的调查。调查发现，贵州省部 分地区野生青蛙及蛇裂头蚴的自然感染率分别为18.04% （882/4 888 ）及24.04% (25/104)[11] 。人体裂头蚴病不仅与青蛙、蛇等裂头蚴的感染率有关，还与人们的 生活方式、饮食和卫生习惯等因素密切相关。迄今为止，尚没有对蛇株裂头蚴与 不同宿主相容性进行过观察研究，因此，本次试验在前期的基础上对蛇株裂头蚴 感染不同动物，对其与不同宿主相容进行了观察和比较。2012 年，徐婧等对蛙 株裂头蚴进行了扫描电镜的观察，与许世锷等（1983）[24]的结果相似。目前， 尚没有对不同虫株的形态结构的观察，因此，本次试验将王锦蛇源曼氏迭宫绦虫 的幼虫及成虫进行了形态结构的观察，为虫株的鉴别提供形态学资料。 2008～2009 年我课题组已采用SDS技术将裂头蚴可溶性蛋白分离出 33 条蛋白带，分子量范围在Mr 13 800～145 400，其中Mr 26 500 、Mr 37 600 、 Mr 82 200 和Mr 130 200 为高丰度蛋白区带，经Western blotting 分析，Mr 31 600 和Mr 37 600 条带能被曼氏裂头蚴感染小鼠的血清识别。Yang （2010 ）用多克隆 3 / 29 抗体进行免疫组织化学检测，证实Mr 180ku 和Mr 200ku 的蛋白分子为裂头蚴皮 层最表面的主要膜抗原。 裂头蚴的体壁由皮层和皮下层组成。皮层最表面有微毛。微毛遍布整个虫体， 其作用主要是增加皮层的吸收面积，同时也可帮助裂头蚴固着在寄生部位等。微 毛下铺垫着皮层的表层原生质，该原生质层在整个虫体表面是四处延续的，并有 一层质膜将其包绕。质膜对虫体的营养吸收、保护绦虫不受宿主酶的作用及维护 虫体的完整性方面均具有重要作用。Yang(2009)采用尿素成功地将裂头蚴的皮层 进行分离。从自然感染的蛇体皮下组织分离收集裂头蚴，用无菌生理盐水洗涤后， 4 ℃保存，并用于小鼠感染。从感染一个月后的小鼠皮下组织收集裂头蚴，将虫 体单个放入含有RPMI 培养基【含3M 尿素、1mMEDTA、30% （V/V ）胎牛血 清】的培养盘中，37℃进行孵育1~3h。取出并收集裂头蚴皮层。裂头蚴皮层的 分离有助于裂头蚴免疫机制等方面的研究。因此，鉴于以上研究结果设计本课题， 优化裂头蚴皮层分离条件，获得裂头蚴皮层后用SDS技术及Western blotting 分析，为裂头蚴种株的鉴别进一步提供实验数据；同时将为今后的特异 性抗原的筛选以及干预性治疗和诊断靶点的研究等提供有利依据。 4 / 29 第一部分 蛇源曼氏迭宫绦虫超微结构的观察 材料与方法 1.材料 1.1 虫种来源 野生蛇，采自安顺等地。自蛇体内检获裂头蚴，生理盐水清洗后， 进行形态学鉴定。将蛇株裂头蚴感染狗，三周后剖杀，获取曼氏迭宫绦虫成虫。