白芷香豆素类成分及其代谢物的体内外的分析研究及溪黄草的排泄动力学.pdfVIP

中文摘要 白芷香豆素类成分与其代谢物的体内外研究 及溪黄草的排泄动力学 摘 要 白芷为伞形科植物白芷或杭白芷的干燥根，为常用中药。中国药典 (2010年版一部)记载其用于感冒头痛，眉棱骨痛，鼻塞流涕，鼻渊， 牙痛，带下，疮疡肿痛。白芷中主要成分为香豆素类化合物。本研究采用 液质联用(HPLC．MS)技术，测定了大鼠口服白芷提取物后尿样和胆汁 中8种香豆素类化合物的含量，并应用于排泄研究。蛇床夫内酯是白芷药 材中的主要成分之一，本实验室已通过微生物转化制备得到2种代谢物， 采用液质联用技术通过测定2种代谢物的生成量，研究了蛇床夫内酯在大 鼠肝微粒体中的酶促反应动力学。另外，采用HPLC．MS技术鉴定了大鼠 口服蛇床夫内酯后胆汁、尿液、粪便中的代谢物。 溪黄草为唇形科香茶菜属狭基线纹香茶菜lsodon 的干燥全草，用于治疗肠炎、黄疸、肝炎、胆囊炎、胆结石和代谢综合征 等。本研究建立了LC．MS法同时测定大鼠尿液中12种二萜类成分，并用 于排泄动力学研究。 第一部分LC．MS法同时测定大鼠尿和胆汁中8种香豆素类成分及排泄 动力学研究 目的：建立HPLC．MS法同时测定大鼠口服白芷提取物后尿液和胆汁 中8种香豆素类化合物的含量，并应用于排泄研究。8种香豆素类化合物 为佛手柑内酯、花椒毒素、花椒毒酚、异茴芹内酯、氧化前胡素、欧前胡 素、蛇床夫内酯和异欧前胡素。 mmx4．6 C18柱(150mm，5gm)，流动 方法：液相色谱柱为Sapphire 相为甲醇：水(含有O．1％甲酸)，72：28等度洗脱。质谱采用电喷雾离子源 内标为茴芹内酯。大鼠灌胃给予白芷提取物8mL／kg，胆汁按照O．2，2-4， 4．6，6-8，8．12，12．20，20．24h收集，尿液按照O．4，4．8，8．12，12—24， 24．30，30．36，36-48，48．60，60．72 h时间段收集。样品经乙酸乙酯液液 萃取。 中文摘要 结果：8种香豆素类化合物的线性关系良好(r≥0．9932)，日内日间 精密度均小于14．5％，相对误差I迮均在土15％内。提取回收率均大于 合物在胆汁中24h之内基本排泄完全，累积排泄百分数分别为O．045％， 0．082％，0．008％，0．005％，0．004％。 结论：该方法灵敏度高，选择性好，样品处理简单，可用于大鼠口服 白芷提取物后胆汁和尿液中香豆素类化合物的排泄动力学研究。 第二部分蛇床夫内酯在大鼠肝微粒体中的酶促反应动力学研究 甲氧基异欧前胡内酯和5¨．羟基．8．甲氧基异欧前胡内酯)在大鼠肝微粒体 中的生成量，研究其酶促反应动力学。 mrnx4．6 C18柱(150 方法：色谱柱为Sapphire mm，5岬)，流动相为 子模式，采用多反应监测模式(MRM)。内标为茴芹内酯。根据文献方法 将M1和M2加入肝微粒体温孵液中，振荡一段时间。得最佳温孵时间、 蛋白浓度以及底物浓度。双倒数作图法作图得回归方程，计算Vm舭Km 和CLm-n。 结果：方法学考察结果良好，最佳温孵时间为30min，蛋白浓度为1 52 mg·mL～，底物浓度为46．35lxrnol·L～。MIVm戕=1．1 gmol·(min·mg protein)～，Km=133．2岬ol·L～，CLmin-8．655mL·(min·mgprotein)～。M2： l Vma，(21．63lamol’(min。mgprotein)～，Km=292．9