炭疽菌保护性抗原受体结合区的表达及其多克隆抗体的制备.pdfVIP

生物技术通报 ·研究报告 · B IO TECHN OLO G Y　BULL E T IN 2009年第 8期 炭疽菌保护性抗原受体结合区的 表达及其多克隆抗体的制备 1, 2 1 1 1 1 2 2 1 邱炎 　王艳春 　展德文 　陶好霞 　姜娜 　韩秀萍 　李家奎 　刘纯杰 ( 1 军事医学科学院生物工程研究所 病原微生物与生物安全国家重点实验室 ,北京 10007 1; 2 华中农业大学动物医学院 ,武汉 430070) 　　摘 　要 : 　原核表达炭疽杆菌保护性抗原受体结合区并制备该蛋白的多克隆抗体 。从炭疽芽胞杆菌 A 16R 中经 PCR 扩 ( ) ( ) 增得到了炭疽菌保护性抗原 PA 受体结合区基因 ,即 PA 的第四结构域 PA D4 ,将其克隆至含有 6 ×H is编码序列的原核表 ( ) ( ) TM 达载体 p ET2b + 中 ,将重组质粒转化大肠杆菌 BL2 1 D E3 ,在 IPTG诱导下进行蛋白表达 ;用 H iTrap Chelating HP柱纯化 重组蛋白,W estern b lot进一步鉴定 ; 以纯化后的蛋 白为抗原 , 免疫新西兰大耳 白兔制备该蛋 白的多克隆抗体 ; 用 EL ISA 和 ( ) W e stern b lot检测抗血清 。结果表明 , 目的蛋白在大肠杆菌 BL2 1 D E3 中获得了可溶性表达 ,纯化后纯度可达 90% 以上 ;制备 了针对 PA D4 融合蛋白的高效价抗血清 , EL ISA 抗体滴度为 1 ∶102 400;其抗体能特异性识别内源性的 PA 。PA D4 重组蛋白 及其多克隆抗体的获得 ,为后续研究其功能和炭疽疫苗免疫保护机制奠定了基础 。 关键词 : 　炭疽杆菌 　保护性抗原 　受体结合区　原核表达 　多克隆抗体 Expression of the Receptorb ind ing D oma in of Protective An tigen from B acillu s an th racis and Prepara tion of Its Polyclona l An tibody 1, 2 1 1 1 1 2 2 1 Q iu Yan 　W ang Yanchun 　Zhan D ewen 　Tao H aoxia 　J iang N a 　Han X iup ing 　L i J iaku i