菌落总数和大肠菌群测定方法.pptVIP

大肠杆菌的检验方法 大肠杆菌在伊红美蓝琼脂平板上 革兰氏染色 * * 菌落总数和大肠菌群 微 生 物 检 验 流 程 图 无菌取样 样品均质 样液稀释 菌落总数的测定 菌落总数是指食品检样经过处理，在一定条件下培养后，所得1g或1mL检样中所含细菌菌落的总数 菌落总数的检验程序 样品的处理和稀释 充分振摇或研磨 25g或25ml 检样 225mL稀释液 含有玻璃珠的灭菌玻璃瓶或乳钵 1:10稀释液。 1ml 1ml 1ml 9ml水 1:100 9ml水 1:1000 9ml水 1:10000 倒平板 熔化已灭菌的培养基并冷却至45℃左右倒平板，每种培养基每个稀释度各三只平板。 培养及计数 培养条件：倒置于37±1℃温箱内培养48±2h。 计数时间：到达规定培养时间，应立即计数。如果不能立即计数，应将平板放置于0-4℃，但不得超过24h。 计平皿中菌落数：肉眼观察，必要时用放大镜检查。记下各平板的菌落总数，求出同稀释度的各平板平均菌落数。 大肠杆菌的检测 大肠杆菌的生物学特性 大肠埃希氏菌习惯称为大肠杆菌，分类于肠杆菌科，归属于埃希氏菌属。 大肠杆菌为人和动物肠道中的常居菌，一般多不致病，在一定条件下可引起肠道外感染。 检验程序 乳糖发酵试验 分离培养 证实试验 样品稀释后，选择三个稀释度，每个稀释度接种三管乳糖胆盐发酵管。36±1℃培养48±2h，观察是否产气。 将产气发酵管培养物转种于伊红美蓝琼脂平板上，36±1℃培养18-24h，观察菌落形态。 挑取平板上的可疑菌落，进行革兰氏染色观察。同时接种乳糖发酵管36±1℃培养24±2h，观察产气情况。 根据证实为大肠杆菌阳性的管数，查MPN表，报告每100ml（g）大肠菌群的MPN值。 取产酸产气的发酵管中培养液在伊红美兰平板上进行划线 取有核心和带金属光泽的深紫色菌落进行革兰氏染色 乳糖蛋白胨培养液 镜检（革兰氏阴性菌） 37℃ 培养48h 证实产气（阳性）结果与否 37℃ 培养24h 37℃培养24h 乳糖胆盐发酵管 大肠杆菌（右管）产酸产气 伊红美蓝平板 分离　　将乳糖发酵阳性的乳糖胆盐发酵管和增菌液分别划线接种麦康凯或伊红美蓝琼脂平板；污染严重的检样，可将检样匀液直接划线接种麦康凯或伊红美蓝平板，于36±1℃培养18～24h，观察菌落。不但要注意乳糖发酵的菌落，同时也要注意乳糖不发酵和迟缓发酵的菌落。 麦康凯琼脂平板 EMB平板 　　 取其产气管的培养物划线接种于伊红美蓝(EMB)平板，36±1℃培养24±2h。 　　 检查平板上有无具黑色中心有光泽或无光泽的典型菌落。 　　 如有典型菌落，则从每个平板上至少挑取2个典型菌落；如无典型菌落，则从每个平板上至少挑取2个可疑菌落。用接种针接触菌落中心部位,移种到营养琼脂斜面上，36±1℃培养18～24h。