单域抗体与力达霉素的基因工程强化融合蛋白vl-中国科学杂志社.pdfVIP

中国科学 C 辑:生命科学 2007 年 第37 卷 第2 期: 143~151 SCIENCE IN CHINA PRESS 单域抗体与力达霉素的基因工程强化融合蛋白 VL-LDP-AE 的制备及其抗肿瘤作用 苗庆芳 尚伯杨 欧阳志钢 刘小云 甄永苏* ( 中国医学科学院 中国协和医科大学医药生物技术研究所, 北京 100050) 摘要 Ⅳ型胶原酶与肿瘤的侵袭、转移及新血管生成等过程密切相关. 单域抗体作为肿瘤靶向 性载体有许多传统抗体所无法比拟的优势. 以Ⅳ型胶原酶为靶点, 以单域抗体为载体, 以强效烯 二炔抗肿瘤抗生素力达霉素(LDM)为“弹头”, 采用 DNA 重组与分子组装相结合的新方法, 制备 抗Ⅳ型胶原酶单抗 3G11 的轻链可变区单域抗体 VL 与 LDM 的基因工程强化融合蛋白 VL-LDP-AE. MTT 结果表明, VL-LDP-AE 对体外培养的肿瘤细胞有强烈杀伤作用, 对HT-1080 细 −12 −11 胞和KB 细胞的IC50 值分别为8.55×10 和1.70×10 mol/L. VL-LDP-AE 还可抑制鸡胚尿囊膜新 生血管的生成并可破坏人脐静脉内皮细胞(HUVEC)形成内皮小管. 动物实验观察对小鼠移植性 肝癌22(H22) 的疗效. 皮下接种肿瘤, 72 h 后开始给药(分别在接种后第3 和第10 天静脉注射2 次). 以最大耐受剂量进行比较, VL-LDP-AE 0.375 mg/kg 的抑瘤率为89.5%, LDM 0.05 mg/kg 组的抑瘤 率为69.9%, 丝裂霉素(MMC)1 mg/kg 组的抑瘤率为35%. VL-LDP-AE 的分子量为25.4 kD, 远小 于其他形式的抗体药物分子. 作为小型、高效的抗体药物, VL-LDP-AE 在肿瘤靶向治疗中有良好 应用前景. 此外, 其独特的制备方法还可作为制备新型抗肿瘤抗体靶向药物的技术平台. 关键词 Ⅳ型胶原酶 单域抗体 力达霉素 融合蛋白 抗体药物 近年来, 随着越来越多的单抗被批准用于临床, 体)[3~5], 或者将scFv与毒素连接或与酶连接后同前药 抗体药物逐渐成为生物技术药物领域的研究开发热 联合应用 [6,7]. 另一方面, 单域抗体的研制为抗体分 点. 但是, 完整抗体由于分子庞大而存在实体瘤穿透 子 小 型 化 的 发 展 提 供 了 新 的 方 向 . 早 在 性较低和免疫原性等问题, 使其临床应用受到限制 [1]. 1989年, Ward等人[8]就成功表达和分离了具有良好抗 随着基因工程技术的进步, 人们进行了很多尝试来 原结合亲和性的鼠VH 片段, 并把这种单一结构域片 构建不同形式的抗体分子以获得保持传统抗体特异 段称为单域抗体(single domain antibodies, dAbs). 此 性和亲和性的更小结合单位 [2]. 一方面, 将免疫球蛋 后, 人们在骆驼体内发现了天然缺少轻链和CH1 区 白重链可变区(VH)和轻链可变区(VL) 通过一个柔性 的重链抗体. 与抗体分子的其他形式相比, 单域抗体 短肽连接起来的单链Fv (scFv)是研究最多的形式. 为 片段分子量低(~14 kD), 因此更容易在细菌中表达; 了进一步发挥免疫治疗的潜力, 人们在scFv的基础上 它们在体内有更低的免疫原性和更好的实体瘤组织 构建了更为复杂的分子, 比如, 连接两个不同的scFv 穿透性, 减少的甚至