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清热降压胶囊干预SHR海马区组织代谢组学探究 　　[摘要] 选取30只SHR大鼠随机分为3组模型组，卡托普利组，清热降压胶囊组，wistar大鼠10只作为正常对照组，连续给药14 d后取海马组织，采用核磁共振（1H-NMR）代谢组学方法探讨高血压大鼠的海马组织损伤以及清热降压胶囊的保护作用。研究结果发现卡托普利组海马区代谢轮廓明显异于其余3组，另3组大鼠样本分类的趋势非常明显，提示清热降压胶囊能显著改善大鼠海马组织的代谢，鉴定4种代谢产物为二甲基甘氨酸、甘油磷酸胆碱、醛固酮和去甲肾上腺素。高血压大鼠机体代谢异常主要表现在酪氨酸代谢、血管平滑肌收缩以及醛固酮控制的钠盐再吸收失常，清热降压胶囊在有效降压的同时通过影响这些代谢产物来改善高血压的海马区损伤。 [关键词] 高血压病；清热降压胶囊；代谢组学；海马 [收稿日期] 2013-07-07 [基金项目] 国家自然科学基金面上项目；国家自然科学基金青年基金项目 [通信作者] *李运伦，TelE-mail：li.yunlun@163.com 高血压病（essential hypertension）是临床常见病，多发病，高血压所导致的小动脉病变可造成脑内血流减少，供血区脑组织缺血缺氧，从而影响学习和记忆能力[1]。因此对于高血压的治疗不仅是血压达标，更多的是对脑组织损伤的保护。在长期高血压的情况下，中枢神经系统结构和功能也会发生改变，研究表明自发性高血压大鼠4月龄时海马CA1区和齿状回区白质容积减少，6月龄时海马CA1区和齿状回区灰质容积及神经元数目减少[2]。因此，高血压大鼠海马区可能存在相应的损伤，在高血压治疗的同时具有保护海马区功能的制剂可能具备良好的开发前景。 清热降压胶囊作为山东中医药大学附属医院的医疗机构制剂，适用于高血压病肝火上炎证，其药味包括黄连、钩藤、泽泻和芦荟，前期研究发现其具有良好的抗高血压作用，其机制与降低血浆 Renin 和 AngⅡ含量、提高血浆 cAMP 浓度和降低血容量有关[3]，能够干预高血压大鼠血浆代谢组整体代谢模式向正常模式转化[4]，因此本实验采用核磁共振代谢组学技术，从海马组织小分子代谢物层次研究清热降压胶囊对高血压大鼠海马区的保护和逆转损伤作用，应用模式识别技术分析海马区的潜在代谢标志物，结合相应代谢途径，从高血压大鼠海马区损伤入手，分析清热降压胶囊的靶器官保护作用。 1 材料与方法 1.1 动物 8周龄雄性自发性高血压大鼠（spontaneously hypertensive rat，SHR）30只，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，合格证书SCXK（京）2006-0009；8周龄雄性Wistar大鼠10只，购自山东中医药大学实验动物中心，合格证书SCXK（鲁）2005-1015。 1.2 仪器及试剂 AVANCEⅡ600MHz型超导傅立叶变换NMR谱仪，瑞士BRUKER公司产品。清热降压胶囊（鲁药制字；卡托普利片（济南东风制药有限公司，批号0608023）；重水（D2O）为美国CIL公司产品，2，2，3，3-三甲基甲硅烷基丙酸（3-trimethylsilyl-[2，2，3，3-D4]-propionate，TSP），美国Aldrich公司产品。 1.3 分组及给药方法 将SHR大鼠随机分成3组，每组10只，即清热降压胶囊组、卡托普利组和模型组，并设Wistar大鼠10只作为正常对照组。清热降压胶囊组给与18.336生药gkg-1（相当于60 kg成年人每日剂量的20倍），卡托普利加生理盐水适量2.08 gL-1混悬液，对照组给与卡托普利24.96 mgkg-1，模型组和正常对照组给与等量的生理盐水，按等容积不同浓度的原则灌胃给药，每天1次，连续用药14 d。 1.4 海马组织的采集及处理 10%水合氯醛（0.35 mL100 g-1）腹腔注射麻醉大鼠，麻醉成功后，迅速断头取脑，剪开头皮，用止血钳沿大鼠头颅中央骨缝撬开，迅速分离脑组织，于冰上分离出海马组织，将体积比为2∶2∶1的甲醇、氯仿和水（4 ℃）按（3 mL g-1组织）加入到冷冻的组织中，置组织匀浆管中匀浆3 min，重复提取2次，合并提取匀浆，将样品置于4 ℃的冷冻离心机中以3 000 rmin-1离心20 min，取上清液置多通道旋转蒸发仪旋干，以重水600 μL溶解，加入适量TSP作为内标，取上层清液550 μL置于5 mm核磁管中，使用AVANCEⅡ600 MHz型超导傅立叶变换NMR谱仪进行测量。 1.5 NMR数据采集和处理 在超导傅立叶变换NMR谱仪上调用cpmgpr1d脉冲序列，该序列可以较好地去除血液中大分子