生物测定法在丹参亲水凝胶骨架片体外释放评价中应用探究.docVIP

生物测定法在丹参亲水凝胶骨架片体外释放评价中应用探究 　　[摘要] 该研究探讨生物活性测定法在中药缓控释制剂评价中应用的适宜性，建立一种快速的多组分制剂体外释药评价方法，用表征总体行为的生物活性测定法代替目前单一成分的药物释放度测定法，以更好地指导缓控释制剂处方设计。通过HPLC测定不同溶出介质，不同释药速率及成分间不同配伍比例的丹参亲水凝胶骨架片中各有效成分（丹酚酸B、原儿茶醛、迷迭香酸）的累积释放度及紫外分光光度法测定释放液的抗氧化活性，对药物各成分经时曲线与总抗氧化活性经时曲线之间的相关性进行评价。发现各成分的释放曲线与抗氧化活性经时曲线的相关系数r均大于临界r=0.898（P 　　2.1.5 精密度试验 精密吸取混合对照品溶液，分别于同天重复进样6次，按2.1.1项下色谱条件测定峰面积，计算RSD，记作日内精密度；另精密吸取混合对照品溶液10 μL，重复进样3次，连续进样3 d，测定峰面积，计算RSD，记作日间精密度。原儿茶醛、迷迭香酸、丹酚酸B的日内精密度分别为0.56%，0.41%，0.30%，日间精密度分别为0.53%，1.0%，0.94%，表明仪器精密度良好。 1.原儿茶醛；2.迷迭香酸；3.丹酚酸B。 图1 混合对照品溶液（A）、空白辅料（B）及样品溶液（C）HPLC图 Fig.1 HPLC chromatograms of mixed control solution（A）， excipient solution（B） and sample solution（C） 表1 原儿茶醛、迷迭香酸及丹酚酸B的回归方程、相关系数及线性范围 Table 1 Regression equations and ranges of three phenolic acids from Salvia miltiorrhiza 2.1.6 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液10 μL，分别于0，3，6，9，12，18，24，36，48 h进样，记录峰面积，考察其溶液稳定性，原儿茶醛、迷迭香酸、丹酚酸B峰面积的RSD分别为2.3%，1.7%，3.4%，表明供试品溶液48 h内稳定性良好。 2.1.7 重复性试验 取同一批号丹参骨架片（自制），按2.1.2项下方法制备6份供试品溶液，进样10 μL，记录峰面积，计算含量。丹酚酸B、原儿茶醛、迷迭香酸的平均质量分数分别为7.76%，0.043%，0.35%，RSD分别为2.7%，4.2%，3.4%（n=6），表明方法重复性良好。 2.1.8 加样回收率试验 分别精密吸取已知浓度的供试品溶液5 mL（分别含有丹酚酸B 116.57 μg，迷迭香酸5.36 μg，原儿茶醛0.64 μg），置于9支10 mL量瓶中，分别精密量取含丹酚酸B、迷迭香酸、原儿茶醛对照品溶液置于9支量瓶中（低、中、高质量浓度组各平行3份），加水振摇定容至10 mL。分别用0.22 μm微孔滤膜过滤后进样10 μL检测，计算加样回收率，见表2。 表2 丹酚酸B、迷迭香酸、原儿茶醛的加样回收率 Table 2 Recoveries rate of three phenolic acids from Salvia miltiorrhiza 2.2 释放度试验 取自制丹参骨架片6片，采用2010年版《中国药典》二部附录XD第2法[1]以纯水900 mL作为释放介质，50 rmin-1，（37±0.5） ℃，于0.25，0.5，1，1.5，2，3，4，6，8 h定时取样5 mL，经0.22 μm微孔滤膜过滤，取续滤液注入液相色谱仪，分别测定丹酚酸B、原儿茶醛、迷迭香酸的峰面积，计算各成分的累积释放度，结果见图2。 采用相似因子法[14]对迷迭香酸、原儿茶醛与丹酚酸B溶出曲线进行比较，相似因子分别为81.91，62.12（均大于50），表明各成分间释放速率无显著差异。 图2 丹参骨架片3个酚酸类成分的体外累积释放曲线 Fig.2 Drug release kinetics of active components from formulations in vitro 2.3 抗氧化经时曲线的绘制 取上述各个溶出时间点溶出液，0.22 μm滤膜过滤，分别取0.5 mL与0.1 mmolL-1DPPH乙醇溶液3 mL反应30 min，测定吸光度值，计算清除率。以溶出时间为横坐标，DPPH自由基清除率为纵坐标，绘制抗氧化经时曲线，结果见图3。 图3 丹参骨架片各时间点释放液抗氧化活性经时曲线 Fig.3 Antioxidant activity kinetics of release liquid in vitro