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氨基酸分析整体解决方案书
武汉恒信世纪科技有限公司 ISO9001 质量管理体系认证企业
氨基酸分析方法:
第一法PITC 衍生氨基酸分析法
本法系根据氨基酸与异硫氰酸苯酯(PITC)反应,生成有紫外响应的氨基酸衍生
物苯氨基硫甲酰氨基酸(PTC-氨基酸),PTC-氨基酸经反相高效液相色谱分离后用紫外检测,
在一定的范围内其吸光值与氨基酸浓度成正比。本方法的线性浓度范围为 0.025 ~
1.25µmol/ml。
第二法AQC 衍生氨基酸分析法
本法系根据氨基酸与6-氨基喹啉-N-羟基琥珀酰亚氨基氨基甲酸酯(AQC )反
应,生成有紫外与荧光响应的不对称尿素衍生物(AQC-氨基酸),AQC-氨基酸经反相高效液相
色谱后用紫外或荧光检测,在一定的范围内其吸光值与氨基酸浓度成正比。本方法的线性浓
度范围为2.5~200nmol/ml。
第三法 OPA 和FMOC 衍生氨基酸分析法
本法系根据一级氨基酸,在巯基试剂存在下,首先与邻苯二醛(OPA )反应,生
成OPA-氨基酸;反应完毕后,加入9-芴甲基氯甲酸甲酯(FMOC),剩余的二级氨基酸与FMOC
继续反应,生成FMOC-氨基酸,两次反应生成的氨基酸衍生物经反相高效液相色谱分离后用
紫外或荧光检测,在一定的范围内其吸光值与氨基酸浓度成正比。本方法的线性浓度范围为
0.025~2.5µmol/ml 。
第四法DNFB 衍生氨基酸分析法
本法系根据氨基酸与2,4-二硝基氟苯(DNFB)反应,生成有紫外响应的二硝基苯
-氨基酸(DNP-氨基酸),DNP-氨基酸经反相高效液相色谱分离后采用紫外检测,在一定的范
围内其吸光值与氨基酸浓度成正比。本方法的线性响应范围为30~140 pmol。本法所用的2,
4 -二硝基氟苯属易爆、剧毒物质,有强致癌性,且该法对色谱柱要求较高,易损坏色谱柱,
衍生试剂水解生成的2,4-二硝基苯易干扰丝氨酸的测定。除另有规定外,一般不宜采用本
法。
第五法 茚三酮衍生氨基酸分析法
本法系根据氨基酸经阳离子交换色谱柱分离后,与茚三酮反应,一级氨基酸生成
在570nm 处具有最大吸收的紫色化合物,二级氨基酸(如脯氨酸)生成在440nm 具有最大
吸收的黄色化合物,分别在570nm 和440nm 下检测上述反应产物,在一定的范围内其吸光
值与氨基酸浓度成正比。本方法的线性响应范围为20~500 pmol。
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