小球藻锌结合金属硫蛋白(Zn-MT-like)的抗氧化活性研究 Study on Anti-oxidation Activity of Zn-MT-like Induced from C. Vulgaris.pdfVIP

第9卷第4期 中国食品学报 V01．9No．4 0f IIlstituteofFoodscience锄d OO9 2OO9年8月 Chine8e Aug．2 Joumal Tech岫 小球藻锌结合金属硫蛋白【Zn—MT—like)的抗氧化活性研究 李连平 黄志勇 王志聪 刘晓雪 黄丽娥 张 冰 (集美大学生物工程学院 厦门361021) 摘要 目的：研究锌胁迫诱导小球藻类金属硫蛋白的抗氧化活性。方法：小球藻经60岬ol／L锌诱导胁迫培养 8d。离心收集藻细胞；超声波破碎细胞，离心，上清液经凝胶层析柱(葡聚糖G-75)及脱盐柱(葡聚糖G-25)分 离、纯化，得到锌结合金属蛋白；经光谱特征分析，确认为类金属硫蛋白(Zn—MT—like)。对Zn—MT．-like的抗氧化 活性进行比较研究。包括基于Fenton反应体系的羟自由基(·0H)，l，1一二苯基苦基苯肼(DPPH)产生的自由基 和邻苯三酚自氧化产生的超氧阴离子(·02-)自由基的清除能力。结果：小球藻诱导产生的Zn—M’r．1ike对这3种 自由基均有较强韵清除作用。其清除羟自由基、DPPH自由基和超氧阴离子自由基的半数抑制率浓度(IC∞)分别 为13．12、2．23和48．59m扎；其抗羟自由基、DPPH自由基和超氧阴离子自由基的能力高于谷胱苷肽和兔肝锌 诱导的金属硫蛋白(‰一MT8)。结论：小球藻锌结合类金属硫蛋白具有显著的抗氧化活性能力。 关键词 小球藻锌结合金属硫蛋白 自由基抗氧化活性 文章编号 1009—7848(2009)04一0023—05 随着自由基生物学与自由基医学研究的深 除羟基自由基(·OH)、DPPH自由基和超氧阴离子 入。现已证明多种疾病(如：炎症、自身免疫疾病、 自由基(·02-)的能力，为进一步研究小球藻在促进 动脉粥样硬化、放射病、皮肤病和肿瘤等)的发生 免疫和抗肿瘤等保健功能方面的应用提供试验基 和发展与自由基对组织的损伤有密切关系llJ。有研 础。 究发现金属硫蛋白(MTs)具有很强的抗氧化活 性，其清除羟自由基的能力约为超氧化物岐化酶 1材料与方法 (SOD)的10000倍。而清除超氧阴离子自由基的 1．1 材料 能力约为谷胱甘肽(CSH)的25倍闭。目前商品化 海洋小球藻(仍如reZ如移蜥)，由集美大学 的MTs大多从兔肝中诱导提取。由于其生产成本 水产学院王立红老师提供。本实验室工作人员以 高、技术难度大，导致价格昂贵。海洋微藻蛋白质 砂滤海水进行扩大培养，其营养盐配方：1g／L 含量十分丰富。藻细胞经重金属胁迫后．金属离子 KH2P04，0．3 NaHC03，0．5g；／LKN03，O．02g／L mg；／L 能迁移至细胞内而诱导产生与MTs结构有一定 VBl20小球藻培养至对数生长中期， VB。，1．O斗g，L 相似性的蛋白质，即类金属硫蛋白(MT—like)p卅。 以60“mo帆锌诱导，培养8d后，离心收集藻泥。 然而目前对小球藻诱导产生MT—like的研究报道 mmol／L 藻泥用5 EDTA溶液和超纯水清洗并反 极少．更未见有关小球藻类金属硫蛋白抗氧化活 复冻融后。按一定比例加入10栅。觇嘶s-HCl 性的相关报道。本文以锌胁迫诱导海洋小球藻产 000r／