高中植物组织培养实验的教学探究.doc

高中植物组织培养实验的教学探究 　 摘要：针对人教版的高中生物学教材中的植物组织培养实验，介绍一种简便、适合高中生物学实验教学的山芋组织培养方法。详细介绍了母液、培养基的配制方法及配制和保存过程中的注意事项、各种激素的配方和培养基的配制中各个环节，从外植体的选取、清洗及接种各环节详细阐述了无菌营养物初代建立的关键技术。 关键词：植物组织培养 山芋 培养基 教学探究 目前，生物技术在农业、食品工业、医学、能源工业、环境保护各个领域显示出极大的生产潜力作为有力手段的组织培养，也日益受到重视利用植物组织培养技术，可以实现优良品种的快速繁殖大量不含病毒的幼苗连续生产，缩短育种周期等引起广泛的兴趣，1. 实验材料 在市场上选取5、625℃，两周后，长出山芋幼苗，将带有芽的山芋茎段（大约1～2cm2．25只体积为100 mL的小锥形瓶和接种有关器具（接种用的镊子、接种针、培养皿及牛皮纸等）放入高压蒸汽灭菌锅中进行灭菌。 2.2 母液的配制 2.2.1 MS培养基母液的配制 用于植物组织培养的培养基也叫MS固体培养基，该培养基中含有20多种营养成分，包括大量元素、微量元素、铁盐及有机物质四类。为了避免每次配制时都要称量各成分，可先将各种成分按比例配制成浓缩液（大量元素浓缩10倍，微量元素、铁盐及有机物质都浓缩100倍）制成培养基母液（见表1）。母液放于-4℃冰箱中保存备用。 表1 MS培养基母液的配制 类别 成分 规定量（mg） （mg） （mL） 配1升培养基的吸收量（mL） 硝酸钾 KNO3 1900 19000 1000 10 100 硝酸铵 NH4NO3 1650 16500 磷酸二氢钾 KH2PO4 170 1700 硫酸镁 MgSO4·7H2O 370 3700 氯化钙 CaCl2·2H2O 440 4400 微量元素 碘化钾 KI 0.83 83 1000 100 10 硼酸 H3BO3 6.2 620 硫酸锰 MnSO4·4H2O 22.3 2230 硫酸锌 ZnSO4·7H2O 8.6 860 钼酸钠 Na2MoO4·2H2O 0.25 25 硫酸铜 CuSO4·5H2O 0.025 2.5 氯化钴 CoCl2·6H2O 0.025 2.5 铁盐 乙二胺四乙酸二钠Na2-EDTA 37.25 3725 1000 100 10 硫酸亚铁 FeSO4·7H2O 27.85 2785 有机物质 肌醇 100 5000 500 100 10 甘氨酸 2 100 盐酸硫胺素 0.4 20 盐酸吡哆素 0.5 25 烟酸 0.5 25 需要注意的是，大量元素中的氯化钙和铁盐中的硫酸亚铁不能与母液混合，否则会生成沉淀物，以致母液失效，配制时需单独装瓶贮存。 2.2.2 植物激素母液的配制 除了上述四种母液外，培养基中经常添加的各种植物激素也要配成母液贮存，临用时按浓度定量吸取加入。生长素类常用的如2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D、IAA)、NAA)等，细胞分裂素类常用的如6-苄基嘌呤(6-BA)和激动素(KT)等。由于它们大多难溶于水，因此配制方法也各不相同。本次实验我们使用了2，4-D6-BA，各自配制母液方法如下：①2，4-D10 mg，先用2 mL 95%的乙醇溶解，然后加水定容至100 mL，浓度为0.1 mg/mL，放置-4℃冰箱内贮存备用。②6-BA准确称取10 mg，先用2 mL的1 mol/L盐酸或氢氧化钠溶解，然后加水定容至100 mL，浓度为0.1 mg/mL，放置-4℃冰箱内贮存备用。 2.3 固体培养基的配制 取1000 mL烧杯一只，加大量元素10倍母液100 mL，微量元素100倍母液10 mL，铁盐100倍母液10 mL，有机物质100倍母液10 mL，蔗糖30 g，然后加水至1000 mL，待蔗糖充分溶解后用1 mol/L盐酸或氢氧化钠调节pH为6.0，加入琼脂条8 g。最后将烧杯放在电炉上加热，并不断用玻璃棒搅拌，待琼脂完全融化后，停止加热，加水定容至1000 mL。冷却后将培养基分装于五只大锥形瓶中，每瓶200 mL。 本实验为了进一步探究出适合山芋芽愈伤组织形成的激素浓度，共进行了五组实验，每组五个重复组。具体方法是将五只大锥形瓶标记为A、B、C、D、EA、B、C、D2，4-D（0.1 mg/mL）6-BA（0.1 mg/mL）A组各添加1 mL，B组各添加2 mL，C组各添加3 mL，D组各添加4 mL，E组作为空白对照不添加任何激素，各组激素浓度见表2。最后将每组培养基分别分装到5只小锥形瓶中，每只约装40 mL培养基，用灭