毛柄金钱菌产漆酶固体发酵条件及其酶液对稻草木素降解的研究 Optimum Conditions for Production of Laccase from Flammulina Velutipe and Degrading Lignin of Rice Straw with Crude Enzyme.pdfVIP

毛柄金钱菌产漆酶固体发酵条件及其 酶液对稻草木素降解的研究水 刘梦茹 付时雨 詹怀宇 刘 浩 伍 红 骆 娴 (华南理工大学制浆造纸工程国家重点实验室，广州，510640) 摘要：本论文以农作物稻草为主要原料，采用微生物固体发酵方式，考察了碳源、氮源、诱导剂对毛柄金钱菌合成 漆酶的影响，并对提高培养物中的蛋白含量及毛柄金钱菌对稻草中木素的降解进行了探讨。 关键词：漆酶；氮源；碳源；诱导剂；木素 中图分类号：Q939．96，TS743+．14文献标识码：A 文章编号：1671—4571(2006)06-0041-05 毛柄金钱菌(Flammulina 某些微生物生长需水很少，可利用疏松而含有 velutipes)：本实验室保 必需营养物的固体培养基进行发酵生产，称为固体 发酵。固体发酵所用原料一般为经济易得、富含营 养物质的工农业中的副、废产品，如麸皮、薯粉、大豆 ae)。 饼粉、高梁、玉米粉等。根据需要有的还对原料进行 1．2稻草培养基 粉碎、蒸煮等预加工以促进营养物吸收，或者加入尿 称取一定量的风干稻草(长1—2cm)，用水煮 素、硫酸铵及一些无机酸、碱等辅料，改善发酵生产 沸40min后，用清水洗干净。把适当量的土豆汁、葡 条件。天然纤维素有机质是地球上最重要的可再生 萄糖、黄豆、酒石酸铵分别溶于水中。以稻草／水= 资源，世界上大约50％的生物量来自于天然纤维 素，估计年产量在100～500亿t左右。纤维素材料配好的湿草，于121oC下灭菌25min。 的降解是自然界碳素循环的中心环节。目前，有关 1．3 接种 生物再生资源的利用研究已在世界各地展开，以未 经处理的农作物秸秆及废弃物作为主要原料的生物 置或振荡培养。长至4—6d，将菌丝块或菌丝球用 转化研究正在发展之中。 无菌水洗净后放入高速捣碎机中打散，制得菌丝悬 浮液，稀释至一定刻度，供接种用。在250mL三角 漆酶(1aeease，P—diphenoloxidase，ECl．10．3． 2)是目前国内外研究得极为热门的一种多酚氧化 瓶中加入5mL静置培养的菌丝悬浮液，置于28℃的 酶¨。1，属于铜蓝氧化酶中的一小族。自1994年德生化培养箱中。 国学者H．P．Call的漆酶／介体系统(LMS)或称1．4酶液的制备 之为Lignozym的专利技术¨1问世以来，漆酶漂白已发酵酶液由变异株在28℃下150r／min振荡培 成为生物漂白研究的热点，漆酶能够直接降解原料 养6天产生，经8层纱布过滤除去菌丝体和稻草，在 中的木素，对研究纤维素材料转化及制浆造纸脱木 素意义重大。本文通过对毛柄金钱菌漆酶固体发酵 体碳源，收集上清液。 条件的研究，使其过量生产，并对漆酶粗酶液直接降 1．5 木素降解酶活力测定¨1 ABTS溶液和酶 解稻草进行了初步研究，为进一步证实漆酶在稻草 (1)漆酶：用等体积0．5mmol／L 木素降解中的作用提供了一些依据。 增加，每分钟使1}xmolABTS转化所需的酶量为一 1材料与方法 个活力单位(U)；(2)锰过氧化物酶：反应混合液包 1．1 菌种 作者简介：刘梦茹，女，博士研究生，主要从事微生物降解木质纤维素及酶促反应的研究。 t基金项目：本项目为国家自然科学基金30270040)资助课题 2006V01．25No．6 4