2.2 菌种分离.ppt

生产菌种分离、选育及杂交改良1、出发点 采用各种措施来打破菌的正常代谢,对菌进行选育和调节控制,从而大量积累所需要的代谢产物。2、意义 优良的微生物菌种是发酵工业的基础和关键,保障发酵工业产品的种类产量和质量有较大的改善。 生产菌种分离、选育及杂交改良3、理论基础 可遗传的特性变化称为变异，又称突变，是微生物产生变种的根源，同时也是育种的理论基础。 4、相关学科基础 微生物学、生物化学、遗传学等5、发展趋势 通过分子生物学手段,定向构建基因工程菌。 一、简介 菌种的来源 1）根据资料直接向有科研单位、高等院校、工厂或菌种保藏部门索取或购买。 2）从大自然中分离筛选新的微生物菌种。 2.自然界菌种的分离(自然选育) 1) 定义: 不经人工处理,利用微生物的自发突变进行菌种选育的过程。 2).遗传学理论基础: 菌种的自然突变，包括多因素低剂量的诱变效应和碱基对错误配对的互变异构效应。 2.自然界菌种的分离(自然选育)3). 分离思路 新菌种的分离是要从混杂的各类微生物中依照生产的要求、菌种的特性，采用各种筛选方法，快速、准确地把所需要的菌种挑选出来。 实验室或生产用菌种若不慎污染了杂菌，也必须重新进行分离纯化。 有了优良的菌种，还要有合适的工艺条件和合理先进的设备与之配合。 八、毒性试验 自然界的一些微生物是在一定条件下产毒的，将其作为生产菌种应当十分当心，尤其与食品工业有关的菌种，更应慎重。 据有的国家规定，微生物中除啤酒酵母、脆壁酵母、黑曲霉、米曲霉和枯草杆菌作为食用无须作毒性试验外，其他微生物作为食用，均需通过两年以上的毒性试验。 培养分离中要解决的问题 1、“分离什么和从哪里分离出?” 2、必须充分考虑所分离微生物的生产能力、生长速度、生物群体培养和产品生产工艺及其提纯的难易和费用，工业生产发酵罐中稳定性及遗传操作的难易程度等。 3、选择适宜的培养分离方法和检测方法。 作 业 自己设计一完整的方案从自然界中分离筛选重要工业用细菌、霉菌、放射线菌（以具体产品为例）。 总结成功的分离培养方法 (1)认真考它所需产品的特征和生产过程； (2)制订初步的筛选标准； (3)将生态学方法运用到分离和筛选过程。 将生态学方法用于培养分离的一般思路要点 1．罗列出所要分离的微生物类群； 2．根据所采集样本的各种生态参数，描述所要分离的微生物之生态系统或栖息地： 3．将若干样本分成若干类型，如植物和植物各部，土壤(类型和土层)、岩石、水、昆虫和发酵食品等； 4．罗列出所要考察和测量的环境参数，如pH、盐分、水分、氧化还原电势及温度等； 5．列出生物系统中有用的自然底物，如森林土壤中的几丁质、葡萄表皮的果胶； 6．根据上述1-5项中所获得的数据，设计分离方法，即选择适宜的稀释液、底物、试样、天然浸出汁和培养条件； 7．用标准方法作对照来评价生态学分离方法； 8．根据待检材料的生态参数需要，修改已知的方法； 9．运用特定的富集方法，富集那些可能具有筛选意义的微生物类群。 1、抗生素产生菌的分离 抑菌圈法、扩散法、生物自显影法等 试验菌的选择是关键（关系到灵敏度、活性、抗菌谱等） 采用联合试验菌（枯草杆菌和绿色产色链霉菌或巴氏梭状芽孢杆菌）分离到黄霉素 1、抗生素产生菌的分离 采用专一性强的筛选技术也是检出新抗生素的有效方法 主要是利用抗生素作用机制相关的酶、酶抑制剂、激活剂等建立的筛选技术 如：棒酸（clavulanic acid）的发现 通过鉴定氨苄青霉素和待测样品对?-内酰胺酶产生菌克雷氏菌的协同抑制作用 2、抗肿瘤药物产生菌的分离 ? 临床上有效的抗肿瘤药物大多是直接作用于核酸或抑制核酸生物合成的物质 ? 大部分具有抗菌或抗真菌的活性 ? 现发展出利用微生物筛选作用于DNA 的抗肿瘤药物的方法，如生化诱导分析法 3、酶抑制剂产生菌的分离 ? 某些酶与病理相关 ? 如果某种化合物能在体外抑制某关键的人体酶， 它就可能在体内有药理作用 ? 选择与生理和病理关系明确的酶作为靶酶 靶 区 靶 酶 抗高血压 血管紧张素转移酶 抗糖尿病 ?-淀粉酶、蔗糖酶等 抗血脂症 缩合酶 抗组氨 组氨酸脱羧酶、组氨-N-甲基转移酶 4、生长因子产生菌的分离 通过观察分离菌能否促进营养缺陷型菌株的生长，来检测生长因子产生菌。 分离培养基上培养 被杀死的菌落周围有无检测菌的生长圈 影印到能支持