自然发酵酸菜中乳杆菌的分离鉴定与多态性分析.docx

自然发酵酸菜中乳杆菌的分离鉴定与多态性分析张杨，孟祥晨（东北农业大学乳品科学教育部重点实验室食品学院，哈尔滨150030）摘要：以自然发酵的东北酸菜汁液为实验样品，对其中的乳杆菌进行了分离纯化，共得到乳杆菌34株；使用生理生化实验对其中的10株乳杆菌进行了鉴定；并采用16SrDNAPCR-RFLP方法对这10株乳杆菌进行了遗传多态性的分析。结果表明它们分属5个遗传型。关键词：酸菜；乳杆菌；分离鉴定；16SrDNAPCR-RFLP；遗传多态性中图分类号：Q93-331文献标识码：A文章编号：1001-2230（2009）02-0019-04Isolation,identificationandgeneticdiversityanalysisoflactobacillifromnatural-lyfermentednortheastsauerkrautZHANGYang，MENGXiang-chen（KeyLaboratoryofDairyScience,MinistryofEducation,andFoodScienceandTechnologyCollege,NortheastAgri-culturalUniversity,Harbin150030,China）Abstract:Inthisstudy,34strainsoflactobacilliwereisolatedfromthenaturallyfermentedsauerkraut;basedonthephysiologicalandbio-chemicaltests,10strainsofthemwereidentified;the16SrDNAPCR-RFLPwereusedtoanalysisthegeneticdiversityofthese10strains,theresultshowsthattheyweredividedinto5groups.Keywords:sauerkraut；lactobacilli；isolationandidentification；16SrDNAPCR-RFLP；geneticdiversity全序列分析的结果，与16SrDNA全序列分析结果有较好的一致性[3]，但成本比16SrDNA全序列分析低得多，操作方法也比其它分子生物学方法简单。其原理是用限制性内切酶消化不同品种或个体的16SrDNA的扩增产物，通过经电泳分离后表现的限制性片段长度差异，来进行聚类分析。本研究的目的是从自然发酵的优良东北酸菜中分离乳杆菌，利用生理生化试验进行鉴定，并采用16SrDNAPCR-RFLP方法分析所分离菌株的遗传多态性；意义是为筛选发酵性能优良的乳杆菌，制备优良的酸菜专用发酵剂提供更丰富的菌株资源，了解16SrDNAPCR-RFLP方法在乳杆菌多样性分析方面的有效程度。引言0发酵酸菜是东北地区冬季保藏蔬菜的传统方法，其制作原理是乳酸菌利用蔬菜中的糖类等营养物质后发酵产酸。其汁液中含有丰富的乳酸活菌，是良好的乳酸菌菌种来源[1,2]。近年来，由于乳酸菌所具有的特殊生理活性和营养功能，正日益引起人们的重视，酸菜作为一种植物乳酸发酵制品，也越来越受到人们的青睐。深入研究且开发利用东北酸菜资源，对开发蔬菜加工品种、蔬菜原料的综合利用有着积极意义。16SrDNAPCR-RFLP（RestrictionFragmentLengthPolymorphisma，限制性片段长度多态性）是一种简单、快速鉴定大量菌株在种、属水平上遗传关系的方法，此法具有RFLP分析优点，并能预测16SrDNA实验材料样品采集于黑龙江省的15户农家，所有样品均为11.1收稿日期：2008-02-27基金项目：国家科技基础条件平台项目（2005DKA21204-08）资助。作者简介：张杨（1982－），女，硕士，研究方向为乳品微生物。通讯作者：孟祥晨自然发酵，风味口感良好，处于发酵后期（发酵时间约为80d，pH4.0）的酸菜汁。培养基为MRS培养基[4]。19Vol.37，No.22009(total219)研究报告ResearchPapers主要试剂：H2S产生试验、硝酸盐还原试验以及各种碳水化合物水解试验均使用细菌微量生化反应管；Taq酶和各种限制性内切酶；细菌总DNA抽提试剂盒。嗜酸乳杆菌ATCC4356（L.acidophilusATCC4356）。PCR引物。正向引物16sF：5-AGAGTTTGATCCTGGCTCAC-3；反向引物16SR：5-TACGGGTACCTTGTTACGA-3[5]。PCR扩增片段长度约为1500bp。仪器与设备：电热蒸汽压力消毒器，无菌操作台，光学显微镜，精密电子天平，梅特勒-托利多Delta320pH计，厌氧培养箱，9700PCR仪，DY