苹果原生质体培养及植株再生.docxVIP

A cta B ota n ica S in ica苹果原生质体培养及植株再生3丁爱萍王洪范曹玉芬( 中国农业科学院果树研究所, 辽宁兴城 125100)摘要用 苹果 (M a lus p um ila M ill) 胚珠诱导愈伤组织并建立悬浮细胞系。 用 2% 纤维素酶、015% 果胶酶的混合酶液分离悬浮培养物, 可得到 514×106 个/g f r. w t 有活性的原生质体。 这些原生质体在改良的M S、K 8p、D 2 培养基中均可发育成细胞团, 在含 210 m g/L IA A 、210m g/L N A A 、011 m g/L BA 的M S 固体培养基上形成愈伤组织, 更换几次不同的培养基后, 在 分化培养基上分化出不定芽, 在生根培养基上生根形成完整植株。关键词 苹果; 原生质体培养; 再生植株αPRO TO PL A ST CUL TURE A ND PL A NT REGENERA T IO NO F M ALU S PUM ILAD ing A i2p ingΚW ang H ong2fan and C ao Yu2fen; I nstitu te of P om olog y ΨC h inese A cad em y of A g ricu ltu ra l S ciencesΨX ingcheng L iaon ing 125100ΓA bstra ctC a lli w ere induced and su sp en sion cell lines w ere set up f rom ovu le of M a lus p um ila M ill. P ro top la st s ; 5140 ×106 /g f r. w tΓw ere iso la ted f rom su sp en sion cell lines in enzym e m ix tu re so lu t ion con ta in ing 210% O nozuk a R 210Κ 015% p ect ina seΚ 0165 m o l/L m ann ita lΚ0101 m o l/L C aC l2 Κ 017 mm o l/L KH 2 PO 4 Κ013% dex t ran su lfa te po ta ssium sa ltΚa t pH 518 fo r 6 h a t 26℃. T h e cell clum p s w ere fo rm ed f rom p ro top la st s cu ltu red in m od if ied M SΚ K 8p ΚD 2 m ed ia. C a lli w ere fo rm ed on M S so lid m ed ium con ta in ing 210 m g/L IA A Κ 210 m g/L N A A Κ011 m g/L BA. Shoo t s w ere d ifferen t ia ted on d ifferen t ia ted m ed ium af ter sev2 era l ch anges of th e m ed ium. E ven tua llyΚ shoo t s roo ted and develop ed in to w ho le p lan t let s onα收稿日期: 1992208223 接受日期: 国家自然科学基金资助课题。植物学报36 卷272a roo t ing m ed ium.Key words M a lus p um ilaΜP ro top la st s cu ltu reΜP lan t regenera t ion苹果 (M a lus p um ila M ill) 是多年生木本植物, 有性杂交育种年限较长。苹果又是高度杂合体, 杂交后广泛分离, 很难选出有较大突破的品种, 亟待开辟新的育种途径。苹果原生 质体研究开始于本世纪 80 年代, 目前仅有苹果砧木M 9、M M 106 及品种“斯巴坦”再生植, 多数研究均停留在原生质体再生愈伤组织阶段2 —6 。本文从苹果胚珠愈伤组织建立株1的悬浮细胞系分离原生质体, 经培养获得再生植株, 为苹果品种选育开辟了新途径, 并为细胞融合及遗传转化提供了再生系统。材 料 和 方 法(一) 材料多年生苹果树, 品种为“新红星”、“秋锦”、“赤阳”、“辽伏”。(二) 诱导胚珠愈伤组织及建立悬浮细胞系四月末采集大蕾期苹果花蕾, 常规消毒。无菌条件下切去花药部分, 将花蕾纵剖, 接种在M S 培养基上。