色氨酸的测定.doc

1.前言 1.1测定色氨酸的意义 色氨酸(Tryptophan ,Trp)β-吲哚基丙氨酸，C11H12N2O2，相对分子质量204.23,为白色或微黄色结晶或结晶性粉末；无臭，味微苦。水中微溶，在乙醇中极微溶解，在氯仿中不溶，在甲酸中易溶，在氢氧化钠试液或稀盐酸中溶解。色氨酸是植物体内生长素生物合成重要的前体物质，其结构与IAA相似，在高等植物中普遍存在。色氨酸是人体所需的一种重要的氨基酸，对预防糙皮病、抑郁症，改善睡眠和调节情绪，有着很重要的作用,研究色氨酸的分析测定在生物、医学和化学领域有重要意义。 1．2目前国内外测量色氨酸的研究现状 目前测定色氨酸的方法主要有光度法[1]、色谱法[]、毛细管电泳法[]、原子吸收光谱法[5]和电化学法[6-9]等。电化学分析法具有灵敏度高、选择性强、准确度好、分析速度快等特点，因而利用电化学方法测定色氨酸引起了人们极大的兴趣。作为芳香类氨基酸的一种，色氨酸具有一定电化学活性，因此，采用电分析方法直接检测色氨酸是较理想的选择。邹永德[6]研究了多壁纳米碳管修饰玻碳电极伏安法测定色氨酸，研究了色氨酸在该电极上的电化学行为并优化了测定条件.与玻碳电极相比,该修饰电极明显降低了色氨酸的氧化峰电位,提高了氧化峰电流. 在pH7. 2的磷酸盐缓冲溶液中,测定色氨酸的线性范围为2. 5～140μmol/L,检出限为0. 12μmol/L. 对10μmol/L色氨酸测定的相对标准偏差为3. 4 % ( n = 8). 一些常见物质对测定无干扰,应用于人体尿样中色氨酸的含量测定。姚军等人[7]利用聚对苯二酚修饰电极对多巴胺和L-色氨酸的电化学进行研究。实验发现,在pH 515 的NaH2PO4-2Na2HPO4 缓冲溶液中,可用PHQ/ GCE 测定溶液中的DA 和L2Trp ,两者氧化峰电流均与浓度在1 ×10 - 3～5 ×10 - 6 mol/L 范围内呈良好线性关系,相关系数分别为01998 3 和01996 5 ,检出限分别为1 ×10 - 6 mol/L 和5 ×10 - 7 mol/L ,该方法简便快捷。郑燕琼等人[8]制备了多壁碳纳米管修饰玻碳电极，研究了色氨酸( Trp) 和酪氨酸( Tyr) 在多壁碳纳米管修饰玻碳(MWNTs/ GC) 电极上的电化学行为. 结果表明相对于玻碳电极,此修饰电极促进了色氨酸和酪氨酸的电催化. 信号与背景电流比表明相对于酪氨酸此电极对色氨酸有更强的催化作用. 在1. 0 mol/ L 硫酸中此修饰电极对色氨酸和酪氨酸的分离效果最好,故可以在酪氨酸存在下选择性测定色氨酸. 混合液中色氨酸的氧化峰电流与浓度在7. 50 ×10 - 6 ～ 2. 00 ×10 - 4mol/ L 范围内呈良好线性关系,检出限为3. 29 ×10 - 6 mol/ L (信噪比为3) . 将此方法用于17AA 复方氨基酸注射液中色氨酸的回收试验,回收率达到97 %以上. 王晓莹等人[9]研究了色氨酸和52羟基色氨酸在玻璃碳电极上的电化学行为,研究了不同pH、静置时间、扫描速度以及表面活性剂等的影响,探讨了色氨酸和52羟基色氨酸在玻璃碳电极上的氧化机理,建立了线扫伏安法同时测定色氨酸和52羟基色氨酸的方法。实验发现,在含3133 ×10 - 4molPL 十二烷基磺酸钠的011molPL 柠檬酸(pH = 4150) 介质中,52羟基色氨酸和色氨酸分别在+ 01675V 和+ 11070V 产生一灵敏的氧化峰。对52羟基色氨酸,相应的氧化峰的峰高与浓度在2140 ×10 - 5molPL～8100 ×10 -4molPL 范围内呈良好的线性关系,线性相关系数为019994 ;对色氨酸,其氧化峰的峰高与浓度在2140 ×10 - 5molPL～6140 ×10 - 4molPL 浓度范围内呈良好的线性关系,线性相关系数为019929。该方法测量2100 ×10 - 4molPL 色氨酸和52羟基色氨酸的相对标准偏差分别为312 %和318 %( n = 10) 。 1.3化学修饰碳糊电极简介 在电分析化学中，一般所用的电极如汞、贵金属和碳等，只有电子授受的单一作用，溶液中大多数离子在电极上电子转移的速度较慢，为使电极能预定地、有选择性的进行反应，并提供更快的电子转移速度，化学修饰电极(Chemieal Modified Eleetrode，CME)[10]应运而生。化学修饰电极是在电极表面接着某一有选择性的基团来完成的，通过对电极表面接着的分子进行适当的剪载，就可按人的意图给电极预定的功能，以便在电极上有选择地进行所期望的反应，从而在分子水平上实现了对电极功能设计。可以认为化学修饰电极是把富集、分离和测定三者相结合的较理想体系[11]。1973年Lane和Hubbard[12]利用