苏门白酒草论文：苏门白酒草叶斑病的诊断及其病原菌研究.docVIP

苏门白酒草论文：苏门白酒草叶斑病的诊断及其病原菌研究 【中文摘要】苏门白酒草(Conyza sumatrensis)是19世纪初侵入我国的一种重要的外来入侵物种,是危害麦类、玉米、蔬菜、豆类等多种农作物和生态环境的恶性杂草。通过近几年对重庆市不同地区的苏门白酒草进行调查,在苏门白酒草上发现一种新的病害,即苏门白酒草叶斑病。本研究对这种新病害进行了诊断鉴定,分离病原菌,筛选苏门白酒草的生防真菌并研究其主要生物学特性。苏门白酒草叶斑病的诊断.苏门白酒草在田间自然条件发病的病斑呈长梭形或椭圆形,外缘有淡黄色晕圈,中部组织死亡呈褐色。随着时间的增长病斑扩大呈梭形大斑,最后整个叶片死亡。常规组织分离获得病原菌,它们在室内叶片接种后产生的病害症状与田间相同,一般3d后可见明显的病斑,到8d后叶片可部分或完全枯死。从接种叶片的病斑上再分离可获得同样的病原菌。苏门白酒草叶斑病的病原菌分离.通过组织分离和纯化和柯赫氏证病程序,从采自于重庆北碚区、合川区、沙坪坝区等地苏门白酒草叶斑病上获得了3个致病菌株,其中SMBC-22菌株致病性最强,叶片接种发病率达100%,病情指数达75%以上,由此认为该病原菌在苏门白酒草的生物控制中可能具有应用价值,所以对其进行了分类学鉴定和主要生物学特性分析。叶斑病菌SMBC-22的形态学鉴定.菌株SMBC-22在PDA培养基上的菌落呈圆形或近圆形,边缘整齐,表面轮纹状,后期同心轮纹隆起较明显。菌落较薄,初期表面白色,逐渐变为灰白色；气生菌丝不发达,绒状；菌落背面初期也为白色,培养3d后逐渐转变成黑褐色,最终基部形成黑灰相间的纶纹。菌落适宜生长温度为15-30℃,最适生长温度为28℃。菌丝无色,分枝,具隔,直径3.1-4.6μm。在PDA培养基上光暗12 h/12 h条件下培养8d后开始形成分生孢子器,分生孢子器黑色,散生、埋生或半埋生于培养基中,球型或近球形,直径72-140μm,顶端有孔；分生孢子器中以瓶梗式产生分生孢子,分生孢子椭圆形或卵形,无色,单胞,部分细胞中部有溢缩,大小为(4.5-5.8)μm×(1.6-2.1)μm,有1-2个油球。根据这些病菌的特征,参考相关的资料将该病原菌初步鉴定为茎点霉属(Phoma)。SMBC-22的分子鉴定.提取SMBC-22菌株的基因组DNA,用真菌的通用引物ITS4和ITS5进行PCR扩增得到约500 bp的rDNA-ITS区段。同时用LROR和LR7引物进行PCR扩增得到约为1300 bp的rDNA-LSU区段。扩增产物测序后提交到NCBI GenBank获得登录号分别为HQ645974和JF966194。通过在GenBank进行Blast对比分析,并构建了相关真菌种类的系统进化树,由此得知该菌株的ITS序列与已有巨腔茎点霉(phoma macrostoma)菌株DQ474092处于一个最小的分枝内,相似性达到99%,而其LSU序列与巨腔茎点霉的菌株序列GU238096处于同一分枝内,相似性也为99%。两个序列与茎点霉属其它种类菌株的相应序列的相似性都小于98%。据此,最终鉴定SMBC-22为巨腔茎点霉(P. macrostoma)。SMBC-22的相关影响因子测定.通过实验观察到菌株SMBC-22最适培养基为PDA培养基,产孢量也最大,菌落最适生长温度范围为22-30℃,最适产孢温度为28℃,分生孢子在10-30℃之间均可萌发,最适孢子萌发温度为25℃；该菌在pH 6.0-9.0范围内可较好地生长,pH 8.0最适宜产孢；分生孢子在pH 5.0-11.0均可萌发,最适萌发pH值为7.0。该病原菌对葡萄糖、蔗糖两种碳源及酵母浸膏、硝酸铵两种氮源利用率最好,在葡萄糖和硝酸钾上菌落长势、菌丝重量和产孢量大；光暗交替的环境更易菌株生长,在光暗16h/8h条件下菌株产孢浓度最大,而光照条件对菌株孢子萌发影响不显著。另外,菌株分生孢子要相对湿度在90%以上时才能萌发。在相对湿度到达100%时,孢子萌发率为最高74.6%。同时通过测试,分生孢子的致死条件为60℃下处理20 min。SMBC-22寄主范围的测定.本研究通过测定SMBC-22菌株对6个科18个种的植物(禾本科的小麦、玉米、水稻,茄科的茄子、辣椒、番茄,十字花科的油菜、白菜、萝卜、甘蓝,豆科的四季豆、豇豆,苋科的菠菜和葫芦科的黄瓜、南瓜、西瓜、冬瓜、丝瓜)是否具有致病性,来判断其寄主范围。接种15 d后观察没有引起任何作物植株发病。同时,用SMBC-22菌株的培养滤液和分生孢子萌发液处理供试作物种子和作物植株后,作物种子的萌发率以及植株的生长与清水空白对照没有显著差异。这表明,苏门白酒草病原菌SMBC-22及其产生的次生代谢产物对这些主要的经济作物都没有致病力。即该病原菌对作物的安全性高,具有发展成为苏门白酒草生防因子的潜