平皿计数法水中细菌总数的测定.pdf

水中细菌总数的测定 平皿计数法 《水与废水检测分析方法》 （第四版增补版） stt-ynzk 2013年6月 目 录 测定方法、方法依据以及测定范围 测定原理 检测试剂、仪器设备 分析步骤 结果计算 一.测定方法：平皿计数法； 二.方法依据：《水与废水检测分析方 法》（第四版增补版）； 三.测定范围 ：水中细菌总数的测 定。 四.测定原理 细菌总数测定是测定水中需氧菌、兼性 厌氧菌和异样菌密度的方法。因为细菌 能以单独个体、成双成对、链状、成簇 等形式存在，而且没有任何单独一种培 养基能满足一个水样中所有细菌的生理 要求。所以，由此法所得的菌落可能要 低于真正存活的细菌总数。 五.试剂 营养琼脂  ⑴成分，蛋白胨10g，牛肉膏3g，氯化 钠5g，琼脂10-20g，蒸馏水1000mL  ⑵制法，将上述成分混合后，加热溶解，调 整pH值为7.4-7.6，过滤，分装于玻璃容器 中，经121、103.42Pa高压蒸汽灭菌20min， 贮存于冷暗处备用。  六.仪器设备  1.高压蒸汽灭菌器  2. 干热灭菌箱  3.培养箱36±1℃  4.电炉  5.天平  6.冰箱  7、放大镜或菌落计数器  8、pH计或精密pH试纸  9、灭菌试管、平皿（直径9cm）、刻度吸管、采样 瓶等 细菌总数测定 器材 一览 七.分析步骤  1.水样的稀释  （1）以无菌操作方法吸取1mL充分混匀的水样， 注入盛有9mL灭菌生理盐水的试管中，混匀成1:10 稀释液。  （2）吸取1:10的稀释液1mL注入盛有9mL灭菌生 理盐水的试管中，混匀成1:100稀释液。按同法依次 稀释成1:1000，1:10000稀释液等备用。如此递增稀 释一次，必须更换一支1 mL灭菌吸管。 2.操作方法  （1）以无菌操作方法用灭菌吸管吸取1mL 充分混匀的水样，注入灭菌平皿中，倾注 约15mL已融化并冷却到45℃左右的营养琼 脂培养基，并立即旋摇平皿，使水样与培养 基充分混匀。每次检验时应做一平行接种， 同时另用一个平皿只倾注营养琼脂培养基作 为空白对照 倾注培养  （2）待冷却凝固后，翻转平皿，使底 面向上，置于36±1℃培养箱内培 养24h，进行菌落计数，即为水样1mL 中的细菌总数。 培养结果  （3）如果测定水源水 用灭菌吸管取2~3个适宜稀释度的水 样1mL，分别注入灭菌平皿内。以下 操作同生活饮用水的检验步骤。 八.计算  1.菌落计数及报告方法  作平皿菌落计数时，可用眼睛直接观察，必 要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平 皿的菌落数后，应求出同稀释度的平均菌落 数，供下一步计算时应用。  在求同稀释度的平均数时，若其中一个平皿 有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应 以无片状菌落生长的平皿作为该稀释度的平 均菌落数。若片状菌落不到平皿的一半，而 其余一半中菌落数分布又很均匀，则可将此 半皿计数后乘2以代表全皿菌落数。然后再 求该稀释度的平均菌落数。 2.不同稀释度的选择及报告方法 ⑴首先选择平均菌落数在30~300之间 者进行计算，若只有一个稀释度的平 均菌落数符合此范围时，则将该菌落 数乘以稀释倍数报告之 ⑵若有两个稀释度，其生长的菌落数 均在30~300之间，则视二者之比值来 决定，若其比值小于2应报告两者的平 均数。 若大于2则报