动态接触条件下固定抗菌剂抗菌活性测定的标准试验方法.doc

动态接触条件下固定抗菌剂抗菌活性测定的标准试验方法。 本标准按E 2149确定的标准颁布;紧随名称的数字表示最初采用的年份，在修订的情况下，则表示最终修订版本的年份。括号内的数字表示最后一次重新核定的年份。上标ε表示自上次修订或重新核定的编辑修改。 1.范围 这种测试方法的目的是评估动态接触条件下，非溶出抗菌处理的试样微生物的生长的抵抗能力。这种动态摇瓶试验的开发是为了在常规质量控制和筛选试验中，克服采用传统测试方法来评估基质限制抗菌能力过程中的困难。这些困难包括保证接触培养液的处理面（如在AATCC 100），在不同接触时间下检索的灵活性，使用不适当应用静态条件（如在AATCC 147），灵敏度，和可重复性。该测试还允许测试由以下因素如硬水、蛋白质、血液、血清、各种化学品、以及其他污物或物理/化学应力或样本操作等引起的污染。1.2表面的抗菌活性是由样品同时运行控制测试的结果进行比较后决定的。1.3浸出抗菌剂的存在是由测定前后抑制区的存在共同决定的。1.4本测试方法应该只有通过微生物技术培训才能完成。1.5本标准可能涉及危险性物质，操作和设备。本标准不旨在解决所有的安全问题，如果有的话，与其使用有关。在使用之前建立适当的安全和健康措施，并确定规章限制的适用性，是本标准使用者的责任。 2．参考文献2.1 ASTM标准：1054实践于评估灭活剂，主要为应用于消毒剂、防腐剂、或腌制产品的抗菌剂。.2其他文件：试验方法A ATCC 147-1998纺织材料抗菌活性评价：平行划线法。美国纺织化学家和染色家协会，RTP，NC 试验方法AATCC 100-1999织物的抗菌整理，美国纺织化学家和染色家协会，RTP，NC 3．测试方法概要3.1固定抗菌剂，如表面复合材料，正常使用条件下不得随意扩散到他们的环境中。如AATCC 147中的测试方法直接依赖于来自处理过的织物中的抗菌剂的准备浸出能力，这些试验方法用于评估固定化抗菌剂是不合适的。下面的试验方法，通过在整个试验过程中试样在细菌悬液中的恒定搅动来确保细菌和处理过的纤维、织物、或其它基质之间有良好的接触。这个测试方法适合于评价应力或改良的试样，伴随着适当的控制。注1：应力可能包括洗衣，磨损和磨耗，辐射和蒸汽消毒，紫外照射，溶剂处理，感温性，或类似的物理或化学处理。 4．意义和使用4.1基质抗菌剂的抗菌活性是依赖于与微生物及活性化学剂的直接接触。此测试通过表面束缚材料样品在浓缩的细菌悬浮液中接触震荡一个小时或由研究者指定的其他接触时间，来确定处理样本的抗菌活性。悬浮液在接触和培养之前和之后都被连续的稀释。在悬浮液中存活的微生物数量确定和百分比减少量计算，均是基于适当的未经处理的对照组进行的。注2：此方法主要适用于那些在规定的接触时间内，表面有50％至100％的活性减少的对象。 5．设备5.1灭菌器，5.2培养箱，5.3分光光度仪，5.4手腕式振动器（摇床）：推荐使用手动式振动器，但其他形式的搅拌如相互式振荡器，同样可以满足常规的测试。振荡器必须保证良好的搅拌。旋转振动器是不可接受的。5.5水浴槽，5.6旋涡混合器，5.7玻璃器皿，5.7.1混合瓶，250ml锥形瓶中，加盖，高温高压灭菌。5.7.2稀释容器，5.7.3移液管，5.8琼脂，孔径为8毫米。 6．试剂6.1缓冲溶液：测试试样中用于改变系统pH的溶液，推荐使用Sorensen的磷酸盐缓冲液（pH为6.8）2。其他的合适的缓冲液必须不能引起细菌数量的减少或增加，在使用中应通过事先浓度测试。对于所有的其他样品，建议使用以下溶液，该溶液由试剂级化学品配制。缓冲库存溶液（0.25M KH2PO4）：按以下配制方法配制新的溶液，至少每六个月更新一次：称取34±0.1克磷酸二氢钾到100毫升的烧杯中。加入500毫升的蒸馏水中。用稀的NaOH溶液调节pH值至7.2±0.1。稀释至1000毫升，转移到烧瓶中，4存储。工作缓冲溶液（0.3mm的KH2PO4）：按以下方法配制新的溶液，至少每2个月更新一次：用无菌移液管移取1±0.01毫升库存缓冲溶液溶液，移至含800毫升蒸馏水的烧杯中。加盖并消毒。6.2介质：6.2.1营养液培养基（Difco Laboratories, Detroit, MI or equivalent）或适合于生物体挑选的媒质。6.2.2蛋白胨葡萄糖汁琼脂（Difco Laboratories, Detroit, MI or equivalent）或适合于生物体挑选的媒质。6.3润湿剂表面活性剂——必须确保不会造成细菌数量减少或增加，在预定使用之前须通过浓度测试。注3：Dow Corning, Midland, MI Q2-5211在最终溶液稀释0.01％或等价物可以使用。 7．试验菌7.1 Klebsiella pneumoni