为何动物细胞培养过程将组织分散成单个细胞的呢.ppt

动物细胞工程常用的技术： 动物细胞培养 动物细胞核移植 动物细胞融合 单克隆抗体 等 2、什么是原代培养？什么是细胞贴壁？ 什么是细胞的接触抑制？ 什么是传代培养？ 3、动物细胞培养的条件 4、动物细胞培养技术的应用 动物细胞培养技术 1.动物细胞培养定义 2.动物细胞培养过程 3.动物细胞培养的条件 4.动物细胞培养技术的应用 * 细 胞 工 程 植物细胞工程 外植体 愈伤组织 胚状体或丛芽 完整植株 脱分化 再分化 植物组织培养技术 植物体细胞杂交技术 植物A 植物B A原生质体 B原生质体 原生质体融合 组织培养 杂种植株 动物细胞工程 2.2动物细胞工程 基础 2.2.1 动物细胞培养和核移植技术 一、动物细胞培养 1、概念(p44)：从动物机体中取出相关组织，将它们分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。 2.原理： 细胞增殖 如何进行动物细胞培养? 请同学们快速阅读课本P44-P46有关于动物细胞培养的过程的内容，并思考以下两个问题 1、动物细胞培养的过程是怎样的? 动物细胞培养过程示意图(P45图2-16) 放入二氧化碳培养箱中培养 原 1、动物细胞培养的过程： 取动物组织块，剪碎 选用组织时，一般用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做培养材料，而不用老龄动物的，这是为什么？ 因为幼龄组织或器官上的细胞增殖能力强，有丝分裂旺盛，容易培养。而老龄动物的细胞则相反。 将组织分散成单个细胞 没有 植物组织培养过程将组织分散成单个细胞的吗？ 为何动物细胞培养过程将组织分散成单个细胞的呢？ 成块的组织细胞靠在一起,彼此限制了细胞的生长和增殖 如何将动物组织分散成单个的细胞呢？ 胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可说明细胞间的物质是什么成份？ 先用剪刀剪碎,后用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理 胰蛋白酶水解蛋白质 细胞间的成份是蛋白质(胶原蛋白等) 胰蛋白酶处理组织时要注意什么问题？能够用胃蛋白酶代替吗？ 控制好消化时间，太长会消化细胞膜上的蛋白质 不能，动物细胞培养适宜的pH为7.2—7.4，此环境下胃蛋白酶（2.0）没有活性，而胰蛋白酶(7.2-8.4)的活性较高。 细胞悬液，转入培养瓶中进行原代培养 ★原代培养(P45)：通常将直接从动物体内取出的动物组织消化后的初次培养称为原代培养。(1-10代细胞) ★细胞贴壁(P44)：悬液中分散的细胞贴附在甁壁上的现象 ★接触抑制(P45):细胞在贴壁生长过程中，随着细胞分裂，数量不断增加，最后形成一个单层，此时细胞间相互接触，细胞分裂和生长停止，数量不再增加。 将贴满瓶壁的细胞用胰蛋白酶处理，传代培养 ★传代培养:将贴满瓶壁的细胞用胰蛋白酶处理，然后继续分瓶培养增殖。（10代之后） 上述过程中，在第一培养瓶中培养就是原代培养，之后转移到其它培养瓶中培养就是传代培养 如何理解原代培养和传代培养？ 传代培养的细胞能一直传代下去吗？ 原代细胞一般传至10代左右细胞生长停滞，大部分细胞衰老死亡，少数细胞存活到40~50代，这种传代细胞为细胞株★。（与名师对话P38 扩展阅读2） 有些细胞为何能一直传下去？ 细胞株传代至50代后又出现细胞生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的改变，使其在培养条件下可以无限制传代，这种传代细胞为细胞系★ （与名师对话P38 扩展阅读2） 保存10代以内的细胞，以保持细胞正常的二倍体核型； 人类一般保存的是哪类细胞呢？ ★二倍体的核型：是指染色体组在有丝分裂中期的表型，是染色体数目、大小、形态特征的总和 通过动物细胞培养能使细胞数目增多，但是能否最终培养成新个体？ 不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，不能发育成新的动物个体 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 胰蛋白酶 剪碎 单个细胞 加培养液 制成 细胞悬浮液 原代培养 传代培养 (1-10代细胞) 10-50代 50-无限传代 遗传物质未改变 遗传物质已改变 细胞株 细胞系 胰蛋白酶 分瓶 无菌、无毒 营养物质 适宜的温度和PH值 气体环境 无菌、无毒的环境 对培养液和所有培养用具进行无菌处理 添加一定量的抗生素 定期更换培养液，以便清除代谢产物 营养物质 糖(葡萄糖) 氨基酸 促生长因子 无机盐 微量元素等 合成培养基 动物血清（血浆） 补充合成培养基中缺乏的物质 固体培养基 O2和CO2 温度和PH 哺乳动物多以36.5±0.5度为宜 多数细胞生存的适宜PH 7.2～7.4 气体环境： O2-----细胞代谢所必需的 CO2----维持培养液的PH 95%空气和5% CO2 混合培养箱 ① 生物制品的生产 ② 用于基因工程 ③ 用于检测有毒物质