5-ht及5-ht4受体在正常肾上腺皮质和肾上腺皮质腺瘤组织中表达的研究.docVIP

精品论文 参考文献 5-HT及5-HT4受体在正常肾上腺皮质和肾上腺皮质腺瘤组织中表达的研究 钱晓辉1 赵军2 　　1.长沙市第四医院泌尿外科；2.华中科技大学同济医学院附属协和医院泌尿外科 　　【摘 要】目的：观察5-HT和5-HT4R在人正常肾上腺皮质组织和皮质腺瘤中的分布特点。方法：对10例正常肾上腺皮质组织和33例皮质腺瘤组织进行SP法免疫组化染色。结果：正常肾上腺组织中5-HT由血管旁肥大细胞产生、贮存。5-HT4R主要在肾上腺球状带出现少量表达，在束状带和网状带表达更少；而肾上腺皮质腺瘤许多产类固醇细胞上5-HT和5-HT4R染色均呈显著表达，分别是正常皮质组织的6—12.5倍和3—10倍。表达强度在统计学上具有显著性差异（P＜0.05）。结论：肾上腺腺瘤细胞不但产生而且5-HT，而且同时表达5-HT4R，5-HT可能通过与5-HT4R结合，促使腺瘤的增殖及功能表达，使皮质醇或醛固酮产生释放增加。 　　【关键词】5-HT；5-HT4受体；肾上腺皮质腺瘤；免疫组织化学 　　研究发现，在一些肾上腺皮质腺瘤和产生皮质醇的ACTH非依赖性大结节样肾上腺皮质增生（AIMAH）上可出现异位/异常膜受体的表达增多，且均为G蛋白偶联受体（GPCRs）。当体内相应激素水平发生改变时，受体活性增高并表现出类似ACTH受体的功能，刺激皮质组织增生以及皮质醇/醛固酮的合成和释放，同时可逃脱血浆皮质醇/醛固酮水平增高后的负反馈调节作用。这些异常表达增多或异位表达的受体包括：5-HT4受体、GIP受体、血管加压素受体、beta;-儿茶酚胺受体、LH/HCG受体以及血管紧张素II（AT-2）受体、来普汀（Leptin）受体等[1］。 　　我们采用免疫组织化学的方法对5-HT及5-HT4R在正常肾上腺皮质和肾上腺皮质腺瘤组织中表达情况进行研究，以了解5-HT及5-HT4R的表达情况与肾上腺皮质腺瘤发生的关系，为进一步探讨5-HT及5-HT4R在皮质腺瘤发病机制中的作用提供依据。 　　1材料和方法 　　1.1组织 　　选择武汉协和医院病理科2010—2015年术后确诊肾上腺皮质腺瘤标本33例，男性13例，女性20例，男：女约为3：5，年龄22—55岁（平均42.5岁），其中20例为原发性醛固酮增多症，6例为Cushing综合症，7例为无功能性腺瘤。标本均备常规HE染色??免疫组化染色，光镜观察。将经病理证实为正常的10例肾上腺作为对照。 　　1.2试剂及来源 　　5-HT兔抗人多克隆抗体购置自武汉博士德生物工程有限公司；5-HT4R兔抗人多克隆抗体置自武汉晶美生物科技有限公司。免疫组化S-P二步法试剂盒和DAB显色剂均购自武汉博士德生物工程有限公司。 　　1.3实验方法 　　5-HT及5-HT4R免疫组化染色采用S-P方法。 　　1.4结果判断标准： 　　1.4.1 5-HT免疫组化染色： 　　阳性标准：在800倍镜视野下，5-HT免疫组化染色，在正常皮质细胞或腺瘤细胞胞浆内出现棕黄色颗粒者为阳性细胞，背底不着色或呈淡黄色，胞核为阴性。 　　阳性分级：在800倍镜视野下随机选取5个视野，计数100个细胞，统计阳性细胞百分比，每个视野计数3次后取平均值。阳性细胞 0：-；阳性细胞1—10：＋；阳性细胞10—20：＋＋；阳性细胞＞20：＋＋＋。 　　1.4.2 5-HT4R免疫组化染色： 　　阳性标准：在800倍镜视野下，5-HT4R免疫组化染色，腺瘤细胞膜显著棕黄色着色，无胞浆或胞核内染色。正常肾上腺皮质球状带细胞膜则可呈轻微染色，胞浆及胞核内均无染色。 　　阳性分级：在800倍镜视野下随机选取5个视野，计数100个细胞，统计阳性细胞百分比，每个视野计数3次后取平均值。阳性细胞0：－；阳性细胞1—10：＋；阳性细胞10—20：＋＋；阳性细胞＞20：＋＋＋。 　　采用单盲，重复观察等方法。 　　1.5 统计学处理 　　结果采用统计学卡方检验法分析处理，P＜0.05为差异有显著性。 　　2 结果 　　2.1 5-HT及5-HT4R阳性表达分布： 　　5-HT在正常肾上腺皮质中仅分布于血管旁肥大细胞中，皮质细胞中则不出现（图1）；而在腺瘤组织主要分布在腺瘤细胞和瘤体血管周围肥大细胞中（图3），呈散在阳性或弥漫性阳性着色，主要定位于细胞浆内，呈匀质或细颗粒状。5-HT4R在正常肾上腺球状带细胞膜上少量出现，在束状带和网状带表达更少（图2）；在腺瘤组织主要分布在腺瘤细胞膜上（图4），主要表达在球状带和束状带中，间质无表达。二者在腺瘤组织的分布区域基本一致。 　　2.2 5-HT及5-HT4R阳性表达强度（阳性细胞百分比）： 　　5-HT在正常肾上腺皮质组织中表达水平为0.40%—2.20%（平均数1.36%plusmn;0.41%），在腺瘤组织中为2.4