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野生艾蒿的组织培养杨莹，吴琼，徐碧莲，刘志文( 大连工业大学生物工程学院, 辽宁大连 116034 )摘要：为了保护野生艾蒿资源，以带有侧芽生长点的野生艾蒿茎切段为材料，采用植物组织培养方法，对艾蒿茎切段的分化和生根培养进行了研究。结果表明，0.1%的HgCl2浸泡6～8 min对艾蒿茎切段灭菌有较好的效果。6-BA和IAA分别是艾蒿茎切段芽诱导和生根培养理想激素，而茎切段在MS+0.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L IAA的培养基上培养，侧芽能较好萌发生长，生根多并且快，21 d时的增殖系数可达8～15倍。关键词：艾蒿；组织培养；生根；快繁0 引言艾蒿富含人体生命所必需的蛋白质、氨基酸、多种维生素和矿物质，使得艾蒿具有良好的食用性和饲用性[1-2]。此外，还具有黄酮、挥发油、桉叶烷和三萜类等多种重要的化学物质，每一类化学物质又包含多种组分，具有多种药用价值，因而艾蒿也是最具应用潜力的药用植物之一[3-5]。多年来由于人们大量采集，采集时一般连根拔起，使得在野生条件下只能通过根茎进行繁殖的艾蒿繁殖困难，因此野生资源迅速减少[6]。目前，对于艾蒿的研究多集中于其药用成分分析与提取方面[7-9]，少见对艾蒿组织培养研究的报道[10-11]。为保护野生资源，探索快速繁殖艾蒿的方法，以满足人们的不同需求十分必要。本试验应用组织培养的技术，利用野生艾蒿的茎切段进行诱导培养，确定快繁的最佳实验条件，以期保护野生艾蒿资源，为艾蒿的综合利用及食用和药用等提供原料。1 材料与方法1.1 材料灭菌处理将采集的艾蒿剪除叶片，用自来水冲洗茎段，除去泥沙等杂物，再将材料剪切成1～2 cm的带侧芽小段。置于75%酒精浸泡30 s，再用不同浓度HgCl2溶液中浸泡不同时间，期间搅拌4～6次，共设8个处理。最后无菌水冲洗3～4次，并用无菌滤纸吸干，将茎切段接入MS培养基，每瓶接2～3段，以获取无菌材料。1.2 细胞分裂素对侧芽生长的影响将无菌成活的茎切段分别转接至含有6-BA、激动素(KT)和玉米素(Z)的MS培养基上进行分化成芽培养，均分别设置0.25、0.50、0.75和1.00 mg/L 的4种浓度处理。1.3 生长素对生根的影响将具分枝无菌嫩茎切成长1～2 cm、具有顶芽或侧芽分枝的嫩茎段，接种到0.25 mg/L的IAA、IBA、NAA和2,4-D的MS培养基中进行生根培养。1.4 不同IAA浓度对生根的影响将材料分别接种于为0.25、0.50、0.75和1.00 mg/L 的IAA培养基上，进行嫩茎段的生根培养效果试验。以上3组试验均以不加激素的MS培养基为对照(CK)，重复3次。1.5 培养条件和数据分析所有材料接种后置于光照培养箱内培养，温度设在(25±3) ℃，湿度70%，日光灯连续光照12 h/d，光强3 000 lx的条件下培养。每5～7 d观察一次，对试管苗死亡率、茎高、生根数和平均根长等参数进行统计，并取其平均值为性状值。2 结果与讨论2.1 HgCl2质量分数及灭菌时间对外植体灭菌效果的影响从表1中可以看出，HgCl2的不同质量分数和灭菌时间对外植体感染率和存活率存在较大差异。外植体无论是用0.1%还是0.2% HgCl2灭菌，随着浸泡时间的延长，感染率降低，死亡率上升，而存活率在处理6和8 min最高。由于HgCl2是一种剧毒物质，即使在HgCl2处理完后，用无菌水冲洗4～6次，仍然有少量残留在外植体上，导致外植体死亡，如图1所示。因此选择HgCl2质量分数为0.1%，时间为6～8 min效果最好。2.2 细胞分裂素对分化培养的影响不同种类和浓度细胞分裂素培养21 d，对分化培养的影响结果如表2所示。由表2可知，不同浓度的3种细胞分裂素均能促进艾蒿侧芽的生长，但效果最好的是6-BA。此外生长速率与分裂素质量浓度有关，6-BA质量浓度为0.5 mg/L时较好，一定浓度的6-BA能显著提高芽的高度，平均高度可达3.3 cm，且有较多的侧芽，高浓度则呈一定的抑制作用。表1 不同HgCl2质量分数和处理时间对生长指标的影响Tab.1 The effects of HgCl2 concentration and treatment time on growth indexes组别w/%t/min处理数量染菌率/%死亡率/%存活率/%10.149846.914.338.820.1610139.619.840.630.187834.623.142.340.1107522.641.336.150.249643.816.739.560.268734.425.340.370.288224.436.539.180.2108321.742.236.1(a) 根部(b) 茎部图1 不同HgCl2质量分数和处理时间对植物根部和茎部的影响Fig.1