第5章植物的快速繁殖和脱病毒技术.docVIP

第5章植物的快速繁殖和脱病毒技术 利用离体培养技术，将植物外植体在人工培养基和合适的条件下进行培养，以在短期内获得大量遗传性一致的个体的方法称为离体快速无性繁殖，简称为离体繁殖（in vitro propagation）、微繁殖（micropropagation）或快速（营养）繁殖（rapid propagation）。由离体无性繁殖获得的植株称为试管苗。 无性系(无性繁殖系，克隆）：由同一外植体或细胞增殖的培养物。 一般适用范围： 1) 加速难繁殖或繁殖缓慢植物的繁殖. 2) 易染病毒植物的脱毒繁殖. 3) 不能用种子繁殖的杂合体园艺作物. 4) 需要加速繁殖的数量有限的优选单株、良种、珍稀濒危植物，以及生物工程产生的新品种. 第1节 植物的快速繁殖技术 1 离体快繁的一般技术途径和方法: 快速繁殖过程一般分成以下几个阶段: 准备阶段（0阶段） 初代培养阶段：无菌培养物的建立； 增殖阶段：芽的增殖,促长； 生根阶段：诱导芽生根； 移栽阶段：试管苗的移栽。 1.1 无菌培养物的建立(初代培养; primary culture) 一般过程包括: (1) 外植体的选择和消毒 (2) 培养基和植物生长物质的选择 (3) 环境条件的选择和培养 初代培养注意事项 1）保证无菌 2）条件合适 3）技术过关 4）防止褐变 褐变原因：外植体中的酚类化合物在多酚氧化酶的作用下氧化。 影响褐变的因素 (1)植物种类和基因型 (2)外植体的取材部位和生理状态 (3) 培养基成分 (4) 培养条件和时间 防止褐变的常用方法 （目前尚无通用的防止褐变的有效方法.） 1) 选择适当的外植体 2) 选择合适的培养基和培养条件 3) 使用抗氧化剂 4) 及时转接等 1.2 增殖阶段 (芽的增殖; shoot multiplication) 使外植体在数量上迅速增加。 罗士韦（1978）:植物离体分化过程的类型分5种： 1）无菌短枝型:节培法;微型扦插法 2）丛生芽增殖型 3）器官发生型 4）胚状体发生型 5）原球茎型 李文安（1998）: 分10类 1）器官型 2）器官发生型 3）胚状体发生型 4）原球茎型 5）球茎芽型 6）块茎型 7）鳞茎型 8）孢子型 9）根茎型 10）微枝扦插型 1) 促进侧芽的形成和生长（丛生芽增殖型；促进腋生分枝） 基本过程：初代培养的芽在适宜的培养基上培养，使侧芽不断分化和生长，逐渐形成芽丛，反复切割和转移到新的培养基中继代培养，就可在短时间内得到大量的芽。 外植体：顶芽或侧芽。 植物生长物质：细胞分裂素:常用6-BA、KT、2ip和Zt等;一般加0.1~10mg/L，常用0.5~2mg/L ；生长素常用NAA、IBA和IAA，浓度为0.1~1.0mg/L。 培养条件：一般25oC左右;1000~2000 lx照明，每日16h或24h（或全黑暗）。 特点：能较好保持遗传稳定性；但过程较复杂。 2) 诱导不定芽形成 不定芽：除现有的芽之外，从任何器官上通过器官发生 重新形成的芽. 在许多器官和愈伤组织上都能诱导出不定芽。但可使嵌合性状遭到破坏（图5-1）。 常用细胞分裂素：6-BA,KT和Zt,浓度0.1~10mg/L; 常用生长素：NAA，IAA和IBA。 二者比例:一般细胞分裂素高于生长素，但也有采用接近1的配比。 图5-1 杂色天竺葵的茎尖（上）和叶柄（下）培养 3) 诱导胚状体的形成 (体细胞胚胎发生; Somatic embryogenesis） 外植体选择： 一般使用合子胚、分生组织或子房、花药等生殖器官.植物其它部分也有直接或间接产生胚状体的能力. 培养条件： 在含有丰富铵态氮的培养基上,加2,4-D诱导胚状体的发生,然后转移到降低2,4-D浓度或没有生长素的培养基上使胚状体成熟和萌发. 优点：增殖率高,且具双极性. 应用：人工种子等 缺点：很多主要的作物还不能形成胚状体, 或产生的胚状体难以形成植株,或成苗率太低,以及遗传性不够稳定。 1.3 生根（根的诱导;根的再生;Rooting） 方法：将增殖的芽剥离下来，分别种植到新的培养基上，诱导生根。 植物生长物质：一些植物可以在无激素培养基上生根,其它的需要在培养基中加入适量的生长素,一般浓度为1~10.0mg/L,常用NAA、IBA和IAA。 基本培养基：一般用盐浓度较低的培养基。蔗糖浓度可降低到1.0~