手性高效液相色谱法对佐米曲坦体外立体选择性代谢研讨.pdfVIP

手性高效液相色谱法对佐米曲坦体外立体选择性代谢研究 余露山 姚彤炜 曾苏 (浙江大学药学院药物分析与药物代谢研究室) 佐米曲坦 Zomig 311C90 是一种新型的5-羟色胺1B/1D 受体激动药物 用于急性偏头痛和血管性 头痛的治疗[1 2] 实验发现 佐米曲坦在人肝细胞和鼠肝微粒体中都受细胞色素P4501A2 CYP1A2 介导代谢 其经人肝细胞代谢后生成三种代谢产物 然而经鼠肝微粒体代谢后只生成一种代谢产物 它 们的共同代谢产物是N-去甲基佐米曲坦 实验发现N-去甲基佐米曲坦有更强的5-羟色胺受体激动活性 [3 4] 临床上 许多手性药物对映体表现出不同的临床作用 比如氧氟沙星[5] 普萘洛尔[6] 布洛芬[7] 等 所以 现在一些国家和地区如美国 欧盟 中国和日本的药品管理权威机构要求手性药物只有活性 单体才能被用做药物上市 佐米曲坦就是其中的一种药物 它具有两个对映体 临床上给药的只是其 S-对映异构体 但是 目前没有对R-佐米曲坦研究的相关报道 如其药效学 药动学 代谢过程和药 物相互作用等 虽然临床上只用 S-佐米曲坦 但 R-佐米曲坦作为对映体杂质不可避免地存在于药物制 剂中 残留的 R-佐米曲坦可能会影响 S-佐米曲坦的药效 药动学和代谢过程的改变 导致临床作用的 改变 至今为止 对佐米曲坦的分析测定一般采用反相高效液相色谱的方法[3 4 8] 还没有同时测定 佐米曲坦对映体的手性拆分方法报道 为了研究 R-佐米曲坦的体外代谢情况以及佐米曲坦两对映体间 的相互作用 本文建立了鼠肝微粒体中佐米曲坦的手性分析方法 同时 利用建立的方法研究了佐米曲 坦的体外代谢以及对映体间相互作用 1 2 仪器与试药 岛津LC- 10A 系列高效液相色谱仪 包括 LC- 10AT 双泵 SPD- 10AV 荧光检测器 CTO- 10A 柱温 箱 HPLC-ESI-MS 色谱仪 Aglient 1100 系列 佐米曲坦消旋体和其两个光学异构体 98% HPLC 由浙江大学化学系赠送 地非三唑由浙江大学药学院药物化学教研室赠送 -萘黄酮 枸橼酸三钠盐 枸橼酸脱氢酶 氧化还原型辅酶 NADP/NADPH购于Sigma公司 正己烷和异丙醇购于天地公司 其它试剂都为国产分析纯 3 实验方法 2.1 色谱条件 分析柱 Chiralpak AD-H 柱 250mm 4.6mm 5 m 流动相 正己烷/异丙醇/三乙胺 72/28/0.25 v/v/v 流速 1.0ml/min 柱温 30 激发波长 291nm 荧光波长 350nm 进样量 20 L ex em 1 2.2 微粒体制备 取Sprague-Davey 雄性大鼠 170-210g 6-7 周 以 -萘黄酮为诱导剂按文献方法诱导 制备微 粒体和测定微粒体蛋白质浓度[9 10] -萘黄酮主要诱导细胞色素P450 1A2 CYP1A2 微粒体贮藏 在-80 保存 2.3 体外孵育反应 取微粒体适量 分别加枸橼酸再生系统溶液 0.1 mol L- 1 Tris-HCl缓冲液, pH7.4, 15m mol L- 1 MgCl , 2 12m mol L- 1 枸橼酸 0.38 单位的枸橼酸脱氢酶 和不同浓度的底物适量 体系终体积为0.5ml 微粒 体蛋白质终浓度为0.75mg mL- 1 37 预孵育5min 加5 L NADP/NADPH 0.172 mol L- 1 NADP 和0.018 mol L- 1 NADPH 启动反应 孵育一定时间后加6% HClO 70 L 终止反应 加内标 1mg mL- 1