低温对水稻叶绿体ATP合酶基因表达的调控研究.pdfVIP

摘 要 叶绿体是植物进行光合作用的主要场所，叶绿体ATP合酶 (即CFI-CFo) 存在于叶绿体类囊体膜上，是植物体内进行生理活动的一个关键酶，起着将其 它能量用于合成生物中的能量通货-ATP的能量转换作用。本文旨在研究低温对 编码水稻叶绿体ATP合酶基因表达的影响，为进一步研究低温下水稻光合作用 的运转和调节奠定基础。 水稻叶绿体ATP合酶的九种亚基中有六种亚基由叶绿体基因组编码，它们 是CF,的a,P,。亚基和CF。的I、III,N亚基。本研究中分别将编码CF,的 a,日、。亚基和CF。的I、III.N亚基的基因从水稻叶绿体基因组中克隆出来， 这六种基因分别为atpA,atpfl,atpE,atpF,atpff,atpl,其中atpB-atpE和 atpl-atpH-atpF-atpA形成两个多基因簇，进行共转录。本文也克隆了编码 Rubise。大亚基的rbcL基因和编码叶绿体RNA聚合酶0亚基的rpOE基因。以 耐冷的湘糯 1号和敏感品种 IR-50为材料，水培两周后放入人工气候室8℃冷 处理5天，提取总RNA和总蛋白进行Northernblot和Westernblot分析，同 时测定水稻叶片的光合速率，ATP合酶活性，内源ATP含量的变化。Northern blot的结果显示:分别以二tpA,atpS.atpE,atpF,atpB、atpl,rhcL,rpoB 基因片段为模板合成探针与冷处理不同时间的水稻总RNA杂交，atpl-atpA- atpF-atpA多基因簇中的基因在冷处理24h后mRNA水平显著降低，而atpB- atpE多基因簇中的基因的转录产物对低温反应不一致:信号强的且分子量较大 的。RNA水平没有变化，而信号较弱的分子量较小的mRNA在冷处理24h后mRNA 水平显著降低，抑制程度与atpl,atpff,atpF.atpA的保持一致，同时rbcL 和rpoB的mRNA水平没有变化。Westernblot分析。亚基和m亚基的蛋白水平， 结果显示 ￡亚基和m亚基在植物体内的含量并没有因为低温胁迫而导致降低， 同时Rubisc。大亚基的含量也没有降低。 为探讨低探 卜ATP合酶的基因表达与水稻光合速率、ATP合酶活性和ATP 含量的关系，进一步测定了水稻光合速率、ATP合酶活性、ATP含量的变化。结 果显示:低温F两个品种的光合速率都显著降低，但耐冷品种能维持较高的水 平。低温下耐冷品种ATP合酶活性变化不大，而冷敏感品种的ATP合酶活性则 显著降低。冷处理下两个品种的内源ATP含量都显著升高，耐冷品种的升高幅 度小于冷敏感品种。这些结果说明，逆境下植物光合作用的调节是很复杂的， 尚需更多的研究。 本文还将atPH基因的全序列构建到pET表达载体中，并在大肠杆菌中获得 了体外大量表达，表达的融合蛋自以包含体的形式存在。将融合蛋自经过初步 纯化。免疫家兔获得了特异的抗血清。 关健词:水稻 叶绿体 ATP合酶 低温 表达 ni亚基抗血清 缩略词及英汉对照 Acrylamide 丙烯酞胺 Ampicillin 氨节青霉素 5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl-phosphateP-toluidineSalt 5-浪-4-氯-3-叫噪一磷酸 Bisacrylamides 双丙烯酞胺 Bovineserumalbumin 牛血清蛋白 Hexadeyltrimeamaniu。 十六烷基三甲基澳化胺 Dieyhylpyrocarbonate 二已基焦碳酸盐 N,N-Dimethylformamide 二甲基甲酞胺 Deoxyribonucleosidethiphosphate脱氧核糖核普三磷酸(4种) Dit