山鸡禽流感H9亚型病毒的分离鉴定研究.pdfVIP

中国畜牧兽医学会禽病学分会禽流感及免疫抑制病论坛论文集 山鸡禽流感H9亚型病毒的分离鉴定 戴爱玲杨小燕李晓华 龙岩学院生命科学系动物医学研究所(364000) 摘要：从某珍禽养殖场的山鸡内脏组织中分离到一株病毒，具有血凝活性，经鉴定为H9亚型，表明 禽流感不仅危及家禽，一些珍禽也有自然感染AIV的潜在性。 关键词：山鸡禽流感病毒分离鉴定 禽流感(Avian 动物卫生组织(OIE)列为A类动物疫病，我国将其列为一类动物疫病。依据病毒表面的两种糖蛋白血凝素 较弱，具体表现为病程长，初期症状不明显，无突然大量死亡的现象，我国于1994年已见蛋鸡和肉鸡发病 的报道，但从珍禽山鸡分离到禽流感H9亚型病毒未见报道。2005年6月，本研究所从某珍禽养殖场发病的 山鸡中分离到禽流感H9亚型病毒。 该珍禽养殖场饲养的山鸡发生疫情，突然出现严重的呼吸道症状，咳嗽、流鼻涕、流泪，眼部肿胀， 结膜炎严重混浊，甚至瞎眼，头部肿大。种鸡发病率高，死亡率低，7日龄左右的小鸡发病率和死亡率都很 高，几乎达100％；15日龄的小鸡死亡率也达50—60％。小鸡用多种抗生素及一些中药制剂饮水、肌注，无效。 种鸡喉头出血，眼结膜出血，眼睑有出血斑，腺胃乳头少许出血，肌胃角质层下出血、溃疡，肺炎，气囊 炎，种鸡卵黄膜破裂，卵黄渗出；小鸡肺炎，肝肿大出血，腺胃乳头出血。全场ND和AI—H5按常规免疫接 种，但未做H9免疫。根据临床症状、流行情况、实验室血清学诊断及病毒的分离鉴定确定为感染禽流感H9 亚型病毒，继发霉形体。 1材料与方法 1．1材料 1．1．19—11日龄鸡胚由森宝(龙岩)有限公司提供。 1．1．2新城疫(ND)和禽流感AIVH5型、H9型标准阳性血清，哈尔滨兽医研究所提供。 1．2方法 1．2．1．细菌检查无菌取病死山鸡的肺、肝、脾、脑接种血琼脂平板，37。C培养。 1．2．2血清学检查对送检的病山鸡取血分离血清，HI试验检测AI的H5、H9抗体。 1．2．3病毒的分离与鉴定 1．2．3．1鸡胚接种试验分别将无菌采集母鸡、公鸡、小鸡的肺、气管、脾、脑等病料制成组织悬液(加 冰镇过夜，收获尿囊液，测HA效价。 1．2．3．2病毒鉴定 将具有血凝活性的尿囊液与哈兽所的ND标准阳性血清、AI—H5、H9标准阳性血清做HI试验。 2结果 2．1病死山鸡的肺、肝、脾、脑接种血琼脂平板，37。C培养，没有细菌生长。 病山鸡血清中AIV的H5、H9抗体，见表： 55 中国畜牧兽医学会禽病学分会禽流感及免疫抑制病论坛论文集 AI．H5抗体效价(2“) 母 5 鸡 鸡 鸡 AI．H9抗体效价(2“) 母 8 鸡 公 鸡 小 ．L 鸡 2．3鸡胚接种试验结果 病山鸡组织悬液接种鸡胚后，24小时照蛋，鸡胚无死亡，48小时照蛋，部分鸡胚死亡，死亡鸡胚置于 4。C冰箱冰镇过夜，60小时后剩余鸡胚置于4℃冰箱冰镇过夜，收获尿囊液，测HA效价，母鸡病料接种的 鸡胚尿囊液HA效价为28，公鸡病料接种的鸡胚尿囊液HA效价为27，小鸡病料接种的鸡胚尿囊液HA效价为 29。 2．4病毒鉴定结果 H5、ND阳性血清不能抑制分离毒株的血凝特性，而H9阳性血清能抑制分离毒株的血凝特性，表明所分 离的病毒为禽流感H9亚型，即引起山鸡发病的主要原因是感染了禽流感H9亚型。 3小结与讨论 5．1 从送检山鸡血清的AI抗体分析，母鸡已免AI—H5单联油乳剂苗，结果H5阳性，抗体水平整齐；公鸡 度较大，说明公鸡和小鸡的AIV-H9血清学阳性是感染AIV-H9所致。 5．1从上述发病情况、临床症状及实验室诊断的结果分析，本次山鸡发病死亡主要原因是感染了H9亚型 禽流感病毒，继发霉形体，导致小鸡死亡率较高，种鸡的产蛋率受到影响，由70—80％降至50—60％，最严重 时降至30—40％。疫情发生后，在饲料或饮水中添加丁胺卡那、林可霉素、力巴韦林及一些中药制剂，控制 了继发病，一星期后疫情缓解，种鸡基本不死亡，流行状况符合AIV一1t9发病的特点。