应用mRNA差异显示技术研究绵羊皮肤毛囊差异表达基因研究.pdfVIP

·146- 2005年全国学术年会农业分会场论文专集 应用mRNA差异显示技术研究绵羊皮肤 毛囊差异表达基因 杨华1刘守仁1李大全2赵宗胜2王新华I (，新疆农垦科学院新疆兵团绵羊繁育生物技术重点实验室，新疆石河子832000； 2石河子大学动物科技学院，新疆石河子832000) 摘要：为筛选中国美利奴细毛羊皮肤毛囊相关基因。探讨绵羊羊毛生长的分子机制。应用mRNA差 blot证实差 异显示技术(DD—PCR)分析去毛囊皮肤与正常皮肤表达水平有差异的cDNA，用Northern 异显示基因片段．对差异基因进行测序和同源比较。结果筛选得到两个基因片段，SQ70是绵羊皮肤 关键词：绵羊，皮肤毛囊，mRNA差异显示，基因 新疆是我国的畜牧大省，养羊业是其支柱产业，绵 Reverse 羊羊毛的细度、长度、弯曲、油汗、强度和伸度等不但 TaKaRa公司产品，Trizol试剂、M．MuLV 决定了羊毛与其它纺织纤维的区别，也决定了毛纺 中的工艺性质。从发展畜牧业的角度来看，寻找与绵 DNA标记试剂盒、地高辛DNA杂交检测试剂盒为 羊羊毛生长发育相关的基因，以探讨其分子机制，最 深圳依诺金生物科技公司产品。 终可以分析控制绵羊羊毛品质的生物学过程。 1．2实验方法 1．2．1实验材料的处理 mRNA差异显示技术是由Liang等在1992年建 立的一种寻找差异表达基因的全新方法，具有灵敏度 实验羊选取绵羊左侧体侧部，先用酒精棉球擦洗 高、可检出低丰度mRNA、实验周期短、能同时比较多出4crux4cm大小，再用手术剪将羊毛剪短，备用。 种样品、实验过程中可以步步验证的特点口一，本文采 1．2．2实验设计 用此技术对绵羊皮肤毛囊的相关基因进行了初步的 实验分为2组，实验组在1只绵羊的体侧部将毛 囊去除(1cmx1em)，对照组在1只绵羊体侧部用手 研究，获得了两个相关的ESTs(expressedsequence tags)。 术剪将羊毛剪净(Icmxlcm)。到第10天，待稍长出 1em)，置于DEPC处理的 1材料与方法 绒毛，迅速剪下皮肤(Icmx 1．1材料 水中迅速冲洗，分别放入1．5ml处理的离心管中，冻 1．1．1实验材料 存于液氮中备用。 实验羊取自新疆农垦科学院畜牧兽医所羊场，选 1．2．3mRNA差异显示 取1只中国美利奴军垦型细毛羊，年龄1岁，生长发 使用Trizol试剂分别提取实验组与对照组皮肤 育良好。 RNA，按照 1．1．2主要仪器 计算RNA含量和纯度。各取1¨g M．MuLV逆转录试剂盒说明书，以3。端锚定引物 电泳仪，美国Bio-Rad公司；高速离心机，德国 l，逆转录合成eDNA OligodTl2N(N为A，G