常用液相色谱柱原理及使用维护保养.pptVIP

* （4）样品必须经正确预处理后进样检测，包括： ①检测游离氨基酸含量时，需先除去脂肪杂质后，再上柱分析。 ②测定蛋白质的氨基酸组成时，样品必须经酸水解→去糖和淀粉→去脂肪→去核酸→去无机盐等过程后，再上柱分析。 （5）测定必须在pH5～5.5、100℃条件下进行；衍生化反应进行时间为10～15min；生成的紫色物质在570nm波长下测定，而生成的黄色化合物在440nm波长下测定。 （6）显色反应用茚三酮试剂极易被氧化，随着时间延长发色率会降低。故在较长时间测定样过程中应随时采用已知浓度的氨基酸标准溶液上柱测定以检验其变化情况。 （7）要注意氨基酸分析柱柱填料为疏水性高聚物薄壳型离子交换剂，最好确保流动相pH值在2～10范围内使用。余者，诸如老化、净化、保养等，请参考C18柱。 3、液相色谱柱常见问题分析与解决方案 这部分内容为长期实践积累，重点关注色谱柱使用中经常遇到的问题，并针对这些问题进行适当处理，以延长柱寿命。这些解决办法也不能保证百分之百有效，但一般情况下，可以尝试，往往能得到意外的惊喜。现根据常用液相色谱柱的常见问题分类别详述如下： 3.1普通C8及C18反相色谱柱（C8C18 Reversed-phase chromatography column） 当色谱柱使用较长时间之后，就可能发生柱压升高、分离度不好、柱效降低、峰形不好等情况，这时