IL-10基因多态性与HBV感染易感性研究.docVIP

精品论文 参考文献 IL-10基因多态性与HBV感染易感性研究 高建梅1 刘华兴2 邹云莲1 董虹1 严新民1(通讯作者) (1云南省第一人民医院临床基础医学研究所/昆明理工大学附属医院 云南昆明 650032) (2勐腊县疾病预防控制中心 云南景洪 666300) 【摘要】目的 探讨IL-10启动子rs1800871和rs1800896位点多态性与HBV感染的相关性。方法 运用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术，对200例健康对照和400例HBV感染患者的IL-10启动子rs1800871和rs1800896位点进行基因分型。结果 rs1800871位点基因型分布频率在HBV感染组与正常对照组间显著不同（chi;2=9.625，P=0.008），TT基因型有增高的趋势。以非条件logistic回归模型校正混杂因素后，在T隐性模式下（TT/CC+TC），两组间仍有统计学差异（P =0.034；OR 为1.467；95%CI为1.028-2.094）；而rs1800896位点基因型和等位基因分布频率在两组间差别无统计学意义。结论 IL-10基因多态性与HBV易感性相关，rs1800871 TT基因型可能是HBV感染的危险因素。 【关键词】 IL-10 基因多态性 肝炎病毒 乙型 【中图分类号】R39 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2013）11-0084-02 研究证实，宿主的遗传异质性特别是与免疫应答相关的基因的多态性可导致不同人群或个体间免疫功能的差异，从而与HBV易感性密切关系[1-2]。细胞介素10（interleukin-10,IL-10）是由Th2细胞产生的一种具有多效性的免疫调节性细胞因子，其启动子区域rs1800871和rs1800896位点的多态性可影响IL-10基因的转录活性和血浆IL-10 水平[3-4]，与乙型肝炎病毒的感染和和预后密切相关。本文以运用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱技术 (Matrix-Assisted Laser Desorption/ Ionization Time of Flight Mass Spectrometry，MALDI-TOF-MS)分析了IL-10启动子多态性与HBV感染的相关性，现报道如下： 对象与方法 1．研究对象：在知情同意的原则下，收集云南西双版纳州医院门诊及住院患者血样600份，其中正常对照200例，HBV感染患者400人，诊断标准符合《病毒性肝炎防治方案》。所有观察人员均静脉抽取EDTA-K2抗凝静脉血3ml，充分混匀后-20℃保存备用。 2．Il-10 rs1800871和rs1800896位点多态性分析：全血标本用全血基因组提取试剂盒（百泰克DP1801）提取基因组DNA作为模板，采用MALDI-TOF-MS技术 对IL-10启动子rs1800871和rs1800896位点进行基因分型。首先进行PCR扩增，其中引物浓度为0.1mu;mol/ L，HotStar Taq 1 U，dNTP 浓度为0.5mu;mol/ L，MgCl2 浓度为1.625 mmol/ L，DNA 模板10 ng。PCR 反应的条件为94℃ 15分钟；94℃20秒，56 ℃30秒，72℃1分钟，45个循环；72℃延伸3分钟。随后将扩增后的产物进行SAP纯化后进行延伸反应，其中伸反应引物0.84mol／L，iPlex酶1U，反应条件为94℃ 30秒；94℃5秒，52℃ 5秒，40个循环；80℃ 5秒，5个循环；72℃延伸3 min。反应结束后每个延伸反应产物经树脂纯化后于芯片上点样，MassARRAY Analyzer质谱检测相应位点的基因型。PCR引物和延伸引物见表1。 表1 PCR引物及延伸引物序列 3．统计学分析：采用SPSS11.7统计软件分析，直接计算法计算基因型和等位基因频率，组间频率比较采用x2检验，非条件logistic 回归模型计算相对风险度的比值比（OR）及95%可信区间（CI），Plt;0.05视为有统计学意义。 结果 1.飞行时间质谱检测结果：经x2检验所调查的人群基因型频率分布均符合 Hardy-Weinberg 平衡（Pgt;0.05），样本具有代表性。rs1800871三种基因型均有检出，而rs1800896位点只有AA和AG基因型，结果见图1。 图1 IL-10启动子rs1800871和rs1800896位点飞行时间质谱图