缺血后适应对树鼩血栓性脑缺血时海马rCBF与AS活化偶联反应的影响及其可能机制.pdfVIP

缺血后适应对树鼩血栓性脑缺血时海马rCBF 与AS 活 化偶联反应的影响及其可能机制1 李树清，罗海芸 昆明医学院基础医学院，昆明（650031 ） E-mail ：shuqing591@ 摘 要：目 的：研究树鼩局部脑缺血海马rCBF与星形胶质细胞（astrocyte,AS ）活化的偶联 反应，探讨缺血后适应（postconditioning ，PC ）对rCBF与AS表达胶质纤维酸蛋白（glial fibrillary acidic protein ，GFAP)的影响及其机制。方 法：建立树鼩血栓性局部脑缺血及缺血PC模型， 通过激光多普勒（laser-Doppler,LD ）血流计测量脑缺血后4 、8、12、24及72h海马CA1 区rCBF 的改变；用免疫组化法测定脑缺血上述时间海马GFAP的表达，并用图像分析系统测定其平均 灰度值。于脑缺血后4h重复3次夹闭缺血侧颈总动脉实施缺血PC ，并观察其对海马CA1 区rCBF 和AS活化以及GFAP表达的影响。结 果：树鼩脑缺血后4h海马CA1 区GFAP 阳性细胞数增多， AS表达GFAP增强，24h可见AS胀亡；72h海马CA1 区AS表达GFAP达高峰（120±2.08，P ＜0.01 ）。 脑缺血时海马rCBF逐渐降低，以24h的改变最显著（为2.55±0.28PU ，P ＜0.01 ）；72h时海马rCBF 略有增加，为9.84±1.22 PU。实施缺血PC后，海马CA1 区rCBF逐渐增加，72h最显著（为18.74±1.6 PU ，P ＜0.01 ）；此时海马GFAP表达进一步增强（111±1.29,P ＜0.01) ，但AS胀亡的病理改变基 本消失。结 论：树鼩脑缺血时海马CA1 区rCBF减少的程度与GFAP表达增加具有偶联反应； 多次、短暂的闭塞动物的颈动脉可延长脑缺血治疗的“时间窗”；缺血PC的脑保护机制可能与 增加海马rCBF ，适当活化AS及改善海马微环境有关。 关键词：光化学，脑缺血，缺血后适应，局部脑血流，星形胶质细胞活化，胀亡，偶联反应， 树鼩 缺血后的神经元保护一直是国内外探索的重要领域。近年的研究发现，心梗病人血运重 建后的头几分钟多次阻塞、再灌注，便可获得与缺血预适应（ischemic preconditioning,IP ）相 同的效果，即缺血PC ，类似于动物心脏的研究所见。由此断定，PC 是一种在方法上与 IP 完 全不同，但效果上基本一致的细胞保护措施[1]，PC 的发现提示：机体缺血状态下，内部天然 的内源性保护机制的激活对机体的抗损伤反应具有特殊的生物学意义！由于脑血流（cerebral blood flow; CBF ）的改变被认为是决定预后的主要因素，且CBF 与神经元的活动存在偶联反 应[2]，而海马星形胶质细胞（astrocyte,AS ）活化与CBF 间是否存在偶联反应尚不清楚。揭示 缺血 PC 对缺脑缺血海马 CA1 区rCBF 与 AS 活化偶联反应及其机制具有重要意义，但这一领 域的研究迄今未见报道。因此，本文采用光化学诱导树鼩（其生物学分类接近于灵长类）脑 血栓形成，并通过急性颈总动脉阻塞复制血栓性脑缺血及缺血 PC 模型；通过激光多普勒流量 计测量局部血栓性脑缺血后海马 CA1 区 rCBF 的同时，应用免疫组化方法检测缺血前后星形 胶质细胞活化的标志蛋白——胶质纤维酸蛋白（glial fibrillary acidic protein, GFAP ）的消长变 化，借以探讨脑缺血 PC 对海马 rCBF 与 AS 活化的偶联反应机制，为未来脑缺血 PC 的深入 研究提供参考依据。 1. 材料与方法 1.1 实验动物 1 实验动物与分组 健康成年树鼩 60 只，雌雄不拘，体重（120±20）g;随机分为假手术组（n=10, 1 本课题得到国家自然科学基金资助项目 (No.3066005) 和教育部博士点专项科研基金资助项目 （No.20050678008 ）的资助。 - 1 -