TR1基因双元载体的构建及其转化Construction and transformation of TR1 gene dual vector.pdfVIP

周晓燕：TRl基因双元载体的构建及其转化 目 录 摘罢要………………………………………………………………………………………………………………………………i Abstract………………………………………………………………………………………………………………………．．ii 符号说明…………………………………………………………………………………………iii 第一章文献综述…………………………………………………………………………………．1 1．1弓I言…………………………．．j……………………………………………………………………………………．1 1．2高温胁迫对油菜的影响…………………………………………………………………l 1．2．1高温对油菜生长发育的影响……………………………………………………2 1．2．2高温对油菜品质及产量的影响…………………………………………………2 1．2．3高温对油菜光合作用和呼吸作用的影响………………………………………3 1．2．4高温对油菜生物膜和抗氧化系统的影响………………………………………3 1．3TRl基因……………………………………………………………………………………………………………4 1．4转基因作物中选择标记基因的安全性…………………………………………………4 1．4．1植物基因转化中常用的标记基因………………………………………………．5 1．4．2选择标记基因去除的必要性……………………………………………………6 1．4．3选择标记基因去除的方法………………………………………………………6 1．5转基因油菜的检测………………………………………………………………………7 1．5．1个体或组织水平上的检测………………………………………………………7 1．5．2 DNA水平上的检测……………………………………………………………．．8 1．5．3RNA水平上的检测……………………………………………………………。9 1．5．4蛋白质水平上的检测…………………………………………………………．10 1．6研究目的和意义………………………………………………………………………．．10 第二章材料与方法……………………………………………………………………………．．11 2．1实验材料………………………………………………………………………………．11 2．1．1植物材料……………………………………………………………………．．．．．11 2．1．2质粒及菌种……………………………………………………………………．．11 2．1．3实验中主要使用的试剂及培养基……………………………………………。12 2．1．4主要仪器设备…………………………………………………………………．．14 2．2TRl双T-DNA区双元载体的构建……………………………………………………．．14 2．2．1 TRI基因的获得…………………………………………………………………．14 扬州大学硕士学位论文 2．2．2载体的连接与验证………………………………………………………………15 2．2．3连接产物转化大肠杆菌………………………………………………………．．16 2．2．4连接产物转化农杆菌…………………………………………………………．16 2．2．5质粒DNA的提取与转化………………………………………………………16 2．2．6转TRl基因再生植株的获得…………………………………………………．18 2．2．7农杆菌介导的油菜下胚轴转化体系的优化…………………………………．19 2．2．8再生植株的分子检测……………………………………………………………21 第三章结果与分析……………………………………………………………………………．．25 3．1TRl双T-DNA区双元载体的构建……………………………………………………25 3．2农杆菌介