秸秆原位降解菌选育与应用及其土壤菌群分子多态性变化.pdfVIP

秸秆原位降解菌选育与应用及其土壤菌群分子多态性变化 摘 要 本文利用人工和天然纤维素、半纤维素作为底物，建立了秸秆原位降解菌复式筛 选模型，该法在兼顾微生物自然生态类群的同时，能够快速有效地从大量样品中筛选 优良的秸秆降解菌。通过复式筛选模型分别从采自江苏省农科院腐烂稻秸样品中分离 得到菌株J-1211,J-1212;紫金山森林腐烂落叶样品中分离得到菌株HA-2,HC-6, 根据个体形态、培养特征 (群体形态〕和生理生化的试验结果，参照 《常见细菌 系统鉴定手册》(东秀珠，2001),J-1211,J-1212,HA-2和HC-6初步鉴定属于类芽 袍杆菌属 (Paenibacillus.spp)。供试菌株16SrDNAV3可变区的变性梯度凝胶电泳 结果显示:J-1211,J-1212,HA-2和HC-6图谱不同，说明供试菌株属于不同种。 J-1211,J-1212,HA-2和HC-6耐碱性，pH生长上限大于12;盐度的耐受性大 于5%;对常见的重金属、农药和除草剂的杭性较强，这些特性有利于菌株在不同性 质农田定殖。植物安全性试验发现J-1211,J-1212,H人一2和HC-6发酵液对水稻、辣 椒和棉花没有致病能力，供试植株生长良好，无病征出现。供试菌株对黄单胞菌 (Xanth二二asoryzac)、小麦赤霉病菌 (Fusariumgraminearum),棉花枯姜病菌 (Fusatiummonillforme)有营养物竞争抑制作用. J-1211,J-1212,HA-2和HC-6的酶学特性研究结果显示:HC-6和J-1211的内 切0-1,4-葡聚糖水解酶耐碱能力强，HC-6在pHll.4。时保持最大酶反应活力的61.2 %; J-1211在pHll.40时保持最大酶反应活力的43.2%;J-1212的内切一0-1,4-葡 聚糖水解酶活力50℃仍保持最大酶反应活力的89.2%,淀粉酶活力试验结果显示: HC-6,J-1212,J-1211和HA-2的淀粉酶活力依次为21.6Uml-,18.6Uml-,13.lUml- 和 7.llUml-J-1211,J-1212.HA-2和 HC-6的果胶酶活力分别为 23.05Uml一, 21.48Uml，、21.13Uml-，和21.05Uml，。 通过单因子试验和多因子试验，确定J-1211发酵培养基为:淀粉 。.8%、蔗糖 0.2%、峭酸钠1.5%、酵母膏2.5%、氛化钠0.1%、磷酸氢二钾 0.1%、氛化钙 0.01 %、硫酸镁0.03、三氛化铁。.001、水1000m1,280C、起始pH8.5;J-1212发 酵培养基为:淀粉0.8%、蔗糖0.2%、稍酸钠0.5%、酵母膏2.5%、氛化钠0.1%、 磷酸氢二钾 0.1%、氛化钙 0.01%、硫酸镁 0.03 、三氛化铁 0.001%、水1000m1， 28C、起始pH8.0;HA-2发酵培养基为:糊精。.5%、葡萄糖0.5%、亚稍酸钠1.5%、; 硫酸按 1.50%、氛化钠0.1%、磷酸氢二钾 0.1%、氛化钙 0.01 、硫酸镁 0.03 、 三氮化铁 0.001%、水1000m1,370C、起始pH7.5;HC-6发酵培养基为:糊精。.5%、 葡萄糖。.8%、亚稍酸钠1.5%、;硫酸按1.5%、氛化钠0.1%、磷酸氢二钾 0.1%、 氛化钙 0.01%、硫酸镁 0.03 、三氛化铁 0.001%、水1000m1,370C、起始pH7.5. 菌株最佳组合方式试验结果显示:J-1211,J-1212,HA-2和HC-6等比例混合后 对水稻秸秆的降解效果最好，5天秸杆粗纤维素降解率为88.3%,J-1211,J-1212, HA-2和HC-6组合称为JM秸杆原位降解菌剂;JM菌剂与两种同类菌剂 (均为日本引 进)降解效果比较发现:盆栽试验中，JM菌剂对稻秸纤维素降解率高达87.57%,稻 秸颜色变黑，植物组织明显腐烂，效果显著优于对照菌剂. 秸秆原位降解动态变化研究发现:水稻土含水量40%-60%时，秸杆在20一280C 腐解程度大于一2一100C时的腐解程度，这是因为在20一28℃条件下微生物活动旺盛， 因此在土壤含水量适宜的条件下，温度是影响秸秆腐解的最重要因素;但淹水条件下， 温度不是稻秸腐解的决定因素，土壤通气性差抑制菌剂功能发挥，影响桔秆腐解。在 培养期内。JM菌剂加快稻桔腐解速度，使培养期内土壤速效K和速效p含量迅速提高。 使用JM菌剂的处理在含水量40%-60%的培养条件下，水稻土速