咔唑降解菌Sphingnomonas+yanaoikuyace代谢二苯并呋喃途径研究.pdf

持久性有机污染物论坛2006暨第一届持久性有机污染物全国学术研讨会论文集 yanaoikuyace 咔唑降解菌Sphingnomonas 代谢二苯并呋喃途径研究 盖忠辉，李庆刚，李力，于波，马翠卿，许平’ 摘要：从国内多个石油污染地点采集的土样、水样通过富集培养方法，筛选到咔唑(carbazole， anaoikuyace有99％的相似性；通过对其 CA)降解菌XLDN2．5。其16Srl斟A序列与Sphingnomonas 形态、生理生化特性和16S yanaoikuyace 通过有角度双加氧和侧面双加氧两种途径代谢DF。 关键词：二苯并呋喃；二恶英；有角度双加氧；侧面双加氧 多氯代二苯并二恶英和多氯代二苯并呋喃是在生产杀虫剂、除草剂、木材防腐剂、落叶剂和 多氯联苯过程中的副产物，同时在纸浆漂白、垃圾焚烧过程中也会产生二恶英。二恶英类物质在环 境中含量极微，但毒性极强，具有致突变、致癌、致畸形三致特性，被称为“世界之毒”。土壤中的 微生物能够代谢很多种类的天然的或人工合成的有机化合物。其中的双加氧是细菌代谢芳香类化合 物过程中一个重要的初始反应，相对于微生物代谢联苯、菲等的侧面双加氧，二苯并呋喃(DF) 是研究微生物需氧代谢二恶英的模式化合物，在研究微生物代谢DF等二芳基醚类物质过程中，发 现一种新的双加氧方式：有角度双加氧u捌。在有角度双加氧反应中，连接氧原子的碳和临近的碳 原子同时被氧化生成一种不稳定的半缩醛中间物，该中间物能自发裂解生成2，2’，3．三羟基联苯。 本实验筛选到一株能够以CA为唯一碳源、氮源和能源生长的细菌XLDN2．5，发现该菌株同样 可以降解DF。本文对其进行了菌株鉴定，同时研究了该菌代谢DF途径。 1材料和方法 1．1筛选与培养基 XLDN2．5是从被石油污染的土样中通过富集方法筛选的能够以咔唑为唯一碳源、氮源和能源 m1)：12 生长的革兰氏阴性细菌。无机盐培养基(MSM)(去离子水1，000 K2HP04，11I(J-12P04，0．2 g g NaS04，2．0 7．0。筛选培养基在MSM的基础 gMgS047H20，2．0g gKCl，微量金属混合液1．0rnl，pH _k力n0．5 g葡萄糖。以DF为唯一底物培养时加0．8g／lNI-hCl作为氮源。 g酵母膏和10 1．2分离菌株的鉴定 1．2．1菌株生理生化特征 菌株生理生化特征依据《常见细菌系统鉴定手册》【3l进行。 1．2．216S rRNA鉴定 提取基因组DNA为模板，应用细菌通用引物27fTRll492r，PCR扩增得至U16SrRNA基因。产物 Centerfor 进行电泳检测，纯化测序工作由上海生工生物技术有限公司完成，与NCBI(National Information)Genbank中数据比对。 Bioteelmology 1．3降解实验 ml ml DF首先溶于二甲基亚枫(DMSO)中配成浓溶液，然后加入装有200MSM培养基的1，000 三角瓶中，使其终浓度达至1]120 r／min、30℃ mg／l。以含有DF而不接种的MSM培养基为对照，120 持久性有机污染物论坛2006暨第一届持久性有机污染物全国学术研讨会论文集 培养。 1．4 DF降解产物分析