鸡卵类粘蛋白实验论文.docVIP

鸡卵类粘蛋白的分离纯化、活性及分子质量的测定 摘要：目的 分离纯化鸡卵类粘蛋白并测定其浓度、相对分子质量以及其对胰蛋白酶的抑制活性。方法 先用三氯乙酸—丙酮溶液沉淀鸡蛋清中的杂蛋白，再经离心、丙酮分级沉淀以及透析得到粗品，经过DEAE纤维素（二乙基氨基乙基纤维素）对其进行纯化；考马斯亮蓝法测定粗品和纯品的蛋白浓度，SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测纯度及测定相对分子质量；最后用紫外分光光度法测定鸡卵类粘蛋白的活性。结果 提取到的粗品体积为6.2mL,纯化后得到纯品体积为5.8mL,计算得粗品浓度为15.233mg/mL，纯品浓度为1.636mg/mL，粗品比活力为2625.867U/mg，纯品比活力为4482.383U/mg，纯化倍数为1.707，粗品相对分子质量约为25kD，纯品相对分子质量约为36kD。结论 实验结果证明该实验中所用方法均为较为简便的方法且结果较好。 关键词：鸡卵类粘蛋白 纯化 胰蛋白酶 分子量 SDS Isolation and purification of CHOM its activity、molecular weight determination Abstract: Objective To purify chicken ovomucoid from egg white and determine its concentration and molecular weight and activity. Methods Firstly, CHOM was separated by TCA-acetone, Secondly, crude CHOM was obtained by acetone fractional precipitation, Thirdly, CHOM was purified through DEAE-cellulose column chromatography, Then, the molecular weight of CHOM was determined by SDS, and the activity of CHOM was measured by Lowry method. Result to extract the volume of the crude product is 6.2mL, the volume of the pure product is 5.8mL, the concentration of the crude product is 15.233mg/mL, the concentration of the pure product is 1.636mg/mL, the specific activity of the crude product is 2625.867U/mg, the specific activity of the pure product is 4482.383U/mg, the purification fold is 1.707.The molecular weight of crude product is 25kD, The molecular weight of pure product is 36kD.Conclusion experimental methods described is a more simple and convenient method for purification of CHOM. Key words: CHOM Purification Trypsin molecular weight SDS 鸡卵类黏蛋白（ Chicken Ovomucoid, CHOM）是从鸡卵清中分离的糖蛋白，具有强烈抑制胰蛋白酶的的作用，是典型的胰蛋白酶抑制剂，常用于胰蛋白酶及类胰蛋白酶的酶学性质研究。鸡卵类黏蛋白在pH7.8~8.0的碱性条件下，具有很强的结合胰蛋白酶的活性，而且这种结合是可逆的，因此，可以制成亲和吸附剂，用以纯化胰蛋白酶。鸡卵类黏蛋白在糖蛋白的糖链部分（主要是D－甘露糖、D－半乳糖、葡萄糖胺和唾液酸）的含量上有差别，所以，在电泳行为上常呈现不均一性，经常表现为弥散性条带。目前至少已获得四种不同组分，它们在抑制胰蛋白酶性能上及氨基酸组成上没有多大的区别。卵类黏蛋白在中性或酸性溶液中对热和高浓度的尿素很稳定，在碱性溶液中比较不稳定，尤其当温度较高时易迅速失活。鸡卵类黏蛋白对猪、牛的胰蛋白酶强烈抑制，对枯草杆菌蛋白酶有一定程度的抑制，但对人的胰蛋白酶无明显的抑制作用，对胰凝乳蛋白酶也无抑制作用。1947年Lineweaver 和 Murray[1]等人利用有机溶剂法分离得到卵