结核分枝杆菌培养滤液蛋白32的克隆表达及-中华预防医学杂志.PDF

史堡亟陵匿堂盘查!!!!生!旦筮堡鲞箍!翅堡!也』堕!丛盟：里!!艘!翌；Q!!：y!!：丝：盟!：兰 ·81· ．论著． 结核分枝杆菌培养滤液蛋白32的克隆表达及 血清学检测 毕爱笑 丁元生 刘忠华胡忠义 filtrate 【摘要】 目的 构建结核分枝杆菌培养滤液蛋白32(cuhureprotein32，cFP32)的重组质 粒，在大肠杆菌中表达并纯化重组蛋白cFP32，探讨其对结核病的诊断价值。方法通过聚合酶链反 应技术从结核分枝杆菌H37Rv株基因组中扩增出Rv0577基因，将其克隆到pMDl8一T载体后，再亚克 隆到表达载体pE，121a，在大肠杆菌B也1(DE3)进行表达，经纯化及复性后，通过westemblot分析，并 以酶联免疫吸附试验检测160例血清抗体，其中肺结核患者97例、非结核肺部疾病患者25例，正常 对照38名。结果构建了cFP32重组质粒，并在大肠杆菌中进行了高效表达，表达蛋白经sDs- PAGE分析，在约相对分子质量30000处有表达条带，镍柱纯化后的重组蛋白占总蛋白的90％以上。 western blot证实重组蛋白可以与结核患者血清特异结合。并以此蛋白进行160份血清结核抗体检 测，结果敏感度为63．9％(62／97)，特异度为96．8％(2／63)。结论成功构建pE他1a—cFP32表达载 体，并在大肠杆菌中高效表达cFP32蛋白，对其血清抗体检测证明重组的cFP32蛋白有希望成为结 核病血清学诊断的有效候选者之一。 【关键词】 分枝杆菌，结核；基因表达；血清学试验 and ofCFP32 flf西删砌幽粕dits Expressionpu尚cation of的c曲酬P砌m serodiagIlosUc蛐alysis 肼Ai-戈i∞+，D，ⅣG玩帆一s^e昭，ⅡU劢。愕一^眦，m，劢D昭-一+Dep硎胧m矿M缸r06幻fpgy，胁如cof Sc^oof，JsLL如ou已hiz】e，si钞，JszL如D“2J5J23，Chi，l。 correspo以咄。眦^or：日U劢。增-撕，E僦以：九砒。咧@ci比M￡ ToestablisharecombinamofcFP32of objective Jjl叠弘060c把而um￡“6erc越os蠡 【Abstmct】 plasmid reaction to its Rv0577 chain 抚E．co丘，andanalyzeantigenicity．Methodsgenewas锄plifiedbypoly瑚lemse intovector followedthesubclonimo from thencloned genomeof撇6∞抑百umfM6ercu2∞如。and pMDl8一T by and ofthe theexpressionvectorDE亿1a． RecombinalltCFP32wasexpressedp埘fied．711lleantigenicity recombinantwas Westem．blot．TherecombinantCFP32 wasused proteinanalvzedbvusing purified protein asan toscreentlle8eraof7 TB well鹊theother disea8e antigen pulmonarypatiems(n=97)